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1、精选优质文档-倾情为你奉上切片制作步骤取材与分割固定洗涤脱水透明浸蜡和埋蜡切片粘片脱蜡染色脱水透明封片1、 固定液（1） FAA：福尔马林冰醋酸酒精 50%或70%乙醇90mL+冰醋酸5 mL+福尔马林（37%-40%甲醛）5 mL固定时间最短需10h，一般不低于24h，可兼做保存液幼嫩材料用50%酒精代替70%酒精，可防止材料收缩。如材料坚硬，可略减冰醋酸，略增福尔马林；如材料易收缩，可稍增冰醋酸。久置时可加5 mL甘油，以防止蒸发和材料变硬。如果用在植物胚胎的材料上，改用下面的配方，效果更好：50%乙醇89mL+冰醋酸6 mL+福尔马林（37%-40%甲醛）5 mL（2） 卡诺氏固定液：酒
2、精醋酸氯仿配方1：纯酒精3+冰醋酸1（3:1）配方2：纯酒精6+冰醋酸1+氯仿3（或纯酒精30 mL +氯仿5 mL +冰醋酸10 mL）一般材料不超过24h，固定根尖和花药只需40-60min，固定后用95%酒精（85%酒精）冲洗，每级20min;如不能立即处理，需转入70%酒精中保存。2、 洗涤：FAA固定液无需洗涤直接脱水。3、 脱水：材料中含水，水与石蜡不能混合，通常由50%、70%、80%、90%、无水乙醇，每次1h，其中无水乙醇需2次。材料大的需延长脱水时间（一般此后进行预染色）4、 透明：常用透明剂为二甲苯和氯仿。先经乙醇和二甲苯混合液（1/2乙醇+1/2二甲苯），后纯二甲苯（2
3、次），每次1-2h氯仿不宜在染色后透明。5级进行;1/5氯仿（4/5无水乙醇）2/53/54/5纯氯仿（2次）每级3-4h；最后一次纯氯仿中，放入纯石蜡粉末数次，盖好瓶盖，36温箱36h，使材料慢慢浸蜡。5、浸蜡、包埋：石蜡必须纯净、不含杂质；浸蜡是使石蜡逐渐取代透明剂 石蜡:熔点52-56，一般50-60 选用与乙醇和石蜡均能互溶的有机溶剂，如二甲苯，温箱设置高于石蜡熔点225%50%75%（石蜡、二甲苯溶液）材料透明好后，换入新的二甲苯，然后加入等体积的碎蜡，40温箱，不断加入碎蜡至饱和，然后升温保持3-5h，其间换纯蜡3次，每次约1-2h。（30min也可）包埋是将材料和石蜡一块倒入小盒
4、中，用加热的镊子迅速将材料按需要的切面和一定的间隔排列整齐，将小盒放入冷水中，凝固6、修块：包埋好的材料，按需要的切面将蜡块切成梯形，然后用蜡铲把蜡块底部牢固的粘在木质蜡座上7、切片：需先用切除的蜡块试刀，确定刀的斜度为5-8为宜。一经调整合适后吗，就不要随便动，以免每次试刀。（8-15m）8、粘片：在干净的载玻片上，滴一小滴蛋清甘油（或0.3%明胶水），然后加几滴3%福尔马林或蒸馏水，用解剖针或镊子轻轻将蜡片放在液面上，再将带有蜡片的载玻片放在温台上，温台的温度在45左右，蜡片受热后慢慢伸直，用滤纸吸去多余液体，表面烤干，转入30温箱一昼夜9、脱蜡：二甲苯脱蜡。顺序：二甲苯二甲苯1/2二甲苯
5、+1/2纯乙醇100%乙醇95%乙醇85%乙醇70%乙醇50%乙醇30%乙醇蒸馏水染色，以上每级需要5-10min10、染色：（1）铁帆苏木精染色法（细胞学和胚胎学研究） 4%铁帆媒染30min自来水洗涤数次蒸馏水洗涤数次苏木精染色1-2h自来水洗涤数次蒸馏水洗涤数次2%铁帆分色、并在显微镜下镜检分色后立即用自来水冲洗30min蒸馏水洗涤数次30%乙醇50%乙醇70%乙醇85%乙醇95%乙醇（尽量用吸水纸在切片边缘将溶液吸净、以免带水）100%乙醇（尽量将边缘溶液吸净、以免带水）1/2甲苯纯二甲苯（2次）中性树胶封片注：每道工序约3-5min苏木精用无水乙醇配制成10%的母液，经一个月的氧化后
6、方可使用，用时稀释到0.05%（2）番红固绿染色法70%乙醇1%番红6h或过夜（用50%乙醇配制）70%乙醇85%乙醇95%乙醇0.5%固绿5-30s（60s）或用滴染法（95%乙醇配制）95%乙醇（10min、吸水纸吸尽边缘溶液）100%乙醇（10min、吸水纸吸尽边缘溶液）1/2二甲苯+1/2无水乙醇纯二甲苯（2次）中性树胶封片溶液配制：1%番红溶液：1g番红，溶于99ml蒸馏水中 0.5%固绿溶液：取0.5g亮绿，溶解在100ml蒸馏水中10、脱水、透明脱水时间要短，因为乙醇有褪色作用11、封片常用固封剂为加拿大树胶固封方法：（1）准备好清洁盖片、镊子、树胶、白布等（2）用白布小心擦拭已经透明好的带有标本的载玻片，并在其上滴一滴加拿大树胶（3）用镊子夹持一个清洁的盖玻片，一端先与树胶滴接触，然后缓慢放下盖片，使整个树胶充满盖片（4）将封好的切片放至烤片夹中，放入温箱（40）中烘干。专心-专注-专业