蛋品化验室设计(共23页).doc

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1、精选优质文档-倾情为你奉上目录1、 总体设计12、 实验室性质13、 实验室面积14、 实验项目15、 微生物实验16、 样品采样与送检17、 检样处理18、 菌落总数测定29、 大肠菌群测定410、沙门氏菌测定811、实验台与橱柜1812、电容器1813、实验室制度1814、仪器设备1915、药品试剂2016、实验室总体平面布置图附图一17、橱柜正、侧面示意图附图二18、实验台正侧面示意图附图三19、水管线路、水龙头位置图、照明灯、电话、网络、电插座位置尺寸图附图四一、 总体设计 1、实验室性质该实验室用于面粉的感官实验、微生物实验和理化分析。2、建设规模该实验室属于小型实验室，投资总经费约

2、为65000元。3、实验室面积实验室的总面积约为21平方米，理化分析室也可兼作感官分析室。4、实验项目4.1 微生物实验主要包括菌落总数测定、大肠菌群测定、沙门氏菌测定4.1.1 样品的采样与送检4.1.1.1 鲜蛋、糟蛋、皮蛋；用流水冲洗外壳，再用75%酒精棉涂擦后放入灭菌带内，加封做好标记后送检。4.1.1.2 巴氏杀菌全蛋、冰黄蛋、冰蛋白；先将铁听开处用75%酒精棉球消毒，再将盖开启，用灭菌电钻由顶到底钻入，徐徐钻取检样，肉厚抽出电钻，从中取出250g，检样装入灭菌广口瓶中，表明送检。4.1.1.3 巴氏杀菌全蛋粉、蛋黄粉、蛋白片；将包装铁箱上开口处用75%酒精棉球消毒，肉厚将盖开启，用

3、灭菌的金属制双层旋转式套管采样器斜角插入箱底，使套管旋转收取检样，再将采样器提出箱外，用灭菌小匙自上、中、下部收取检样，装入灭菌广口瓶中，每个检样的质量不少于100g，表明送检。巴氏杀菌全蛋粉、蛋黄粉、蛋白片等产品以生产一日或者一班为一批检验沙门氏菌时，按每批总量的5%抽样，但每批最少不得少于三个检样。测定菌落总数和大肠菌群时，每批按装听过程前、中、后取样三次，每次100g，每批合为一个检样。巴氏杀菌全蛋、冰黄蛋、冰蛋白等产品按生产批号在装听时流动取样。检验沙门氏菌时，冰蛋黄及冰蛋白按250kg取样一件，巴氏消毒冰全蛋每500kg取样一件。菌落总数测定和大肠菌群测定时，在每批装听过程前、中、后

4、取样三次，每次100g合为一个检样。4.1.2 检样处理4.1.2.1 鲜蛋、糟蛋、皮蛋外壳；用生理盐水浸湿的棉拭子充分擦拭蛋壳，然后将棉拭子直接放入培养基内增菌培养，也可将整只蛋放入灭菌小烧杯或平皿中，按检样要求加入定量灭菌生理盐水或液体培养基，用灭菌棉拭子将蛋壳表面充分擦洗后，以擦洗液作为检样检验。4.1.2.2 鲜蛋蛋液；将鲜蛋在流水下洗净，待干后再用75%酒精棉消毒蛋壳，然后根据检样要求，打开蛋壳取出蛋白、蛋黄、全蛋液，放入带有玻璃珠的灭菌瓶内，充分摇匀待检。4.1.2.3巴氏杀菌全蛋粉、蛋白片、蛋黄粉；将检样放入带有玻璃珠的灭菌瓶内，按比例加入生理盐水充分摇匀待检4.1.2.4巴氏杀

5、菌冰全蛋、冰蛋白、兵蛋黄；将装有冰蛋的检样浸泡于流动的冷水中，使检样融化后取出，放入带有玻璃珠的灭菌瓶中充分摇匀待检。4.1.2.5 各种蛋制品沙门培养；以物价手续称取检样，接种于亚硒酸盐煌绿肉汤等培养基中，盖紧瓶盖，充分摇匀，然后放入361培养箱中，培养202h。4.1.2.6 接种以上各种蛋与蛋制品的数量及培养基的数量和成分；凡用亚硒酸盐培养时，各种蛋与蛋制品的检样接种数量都为30g，培养基数量为150mL，凡用煌绿肉汤培养时，检样接种数量、培养基数见下图。4.1.3 菌落总数测定4.1.3.1 食品检样经过处理，在一定条件下（如培养基、培养温度和培养时间等）培养后，所得每g（mL）检样中

6、形成的微生物菌落总数。4.1.3.2 培养基和试剂（1） 平板计数琼脂培养基：胰蛋白胨 5.0 g酵母浸膏 2.5 g葡萄糖 1.0 g琼 脂 15.0 g蒸馏水 1000 mLpH 7.00.2将上述成分加于蒸馏水中，煮沸溶解，调节pH。分装试管或锥形瓶，121 高压灭菌15 min。（2） 磷酸盐缓冲液：磷酸二氢钾（KH2PO4） 34.0 g蒸馏水 500 mLpH 7.2贮存液：称取34.0 g的磷酸二氢钾溶于500 mL蒸馏水中，用大约175 mL的1 mol/L氢氧化钠溶液调节pH，用蒸馏水稀释至1 000 mL后贮存于冰箱。稀释液：取贮存液1.25 mL，用蒸馏水稀释至1 000

7、 mL，分装于适宜容器中，121 高压灭菌15 min。（3） 无菌生理盐水：氯化钠 8.5 g蒸馏水 1 000 mLA.3.2 制法称取8.5氯化钠溶于1 000 mL蒸馏水中，121 高压灭菌15 min。4.1.3.3检验程序4.1.3.4 操作步骤（1） 样品的稀释固体和半固体样品：称取25 g 样品置盛有225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000 r/min10000 r/min 均质1 min2 min，或放入盛有225 mL 稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min2 min，制成1:10 的样品匀液。液体样品：以无菌吸管吸取25 mL 样品置盛有2

8、25 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1:10 的样品匀液。用1 mL 无菌吸管或微量移液器吸取1:10 样品匀液1 mL，沿管壁缓慢注于盛有9 mL 稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用1 支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1:100 的样品匀液。 按 操作程序，制备10 倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用1 次1 mL 无菌吸管或吸头。 根据对样品污染状况的估计，选择2 个3 个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），在进行10 倍递增稀释时，吸取1 mL 样品匀液于无菌平皿内，每个稀

9、释度做两个平皿。同时，分别吸取1 mL 空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。 及时将15 mL20 mL 冷却至46 的平板计数琼脂培养基（可放置于46 1 恒温水浴箱中保温）倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。（2）培养 待琼脂凝固后，将平板翻转，36 1 培养48 h2 h。水产品30 1 培养72 h3 h。 如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时，可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基（约4 mL），凝固后翻转平板，按6.2.1 条件进行培养。（3）菌落计数可用肉眼观察，必要时用放大镜或菌落计数器，记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位（colony-fo

10、rming units，CFU）表示。 选取菌落数在30 CFU300 CFU 之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于30 CFU 的平板记录具体菌落数，大于300 CFU 的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。 其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数；若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘以2，代表一个平板菌落数。 当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时，则将每条单链作为一个菌落计数。4.1.3.5 结果与报告（1） 菌落总数的计算方法 若只有一个稀释度平板上的菌落数在

11、适宜计数范围内，计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每g（mL）样品中菌落总数结果。 若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时，按公式（1）计算：（1）式中：N样品中菌落数；C平板（含适宜范围菌落数的平板）菌落数之和；n1第一稀释度（低稀释倍数）平板个数；n2第二稀释度（高稀释倍数）平板个数；d稀释因子（第一稀释度）。 若所有稀释度的平板上菌落数均大于300 CFU，则对稀释度最高的平板进行计数，其他平板可记录为多不可计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。 若所有稀释度的平板菌落数均小于30 CFU，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。 若所有稀释

12、度（包括液体样品原液）平板均无菌落生长，则以小于1 乘以最低稀释倍数计算。 若所有稀释度的平板菌落数均不在30 CFU300 CFU 之间，其中一部分小于30 CFU 或大于300CFU 时，则以最接近30 CFU 或300 CFU 的平均菌落数乘以稀释倍数计算。（2） 菌落总数的报告 菌落数小于100 CFU 时，按“四舍五入”原则修约，以整数报告。 菌落数大于或等于100 CFU 时，第3 位数字采用“四舍五入”原则修约后，取前2 位数字，后面用0 代替位数；也可用10 的指数形式来表示，按“四舍五入”原则修约后，采用两位有效数字。 若所有平板上为蔓延菌落而无法计数，则报告菌落蔓延。若空白

13、对照上有菌落生长，则此次检测结果无效。称重取样以CFU/g 为单位报告，体积取样以CFU/mL 为单位报告。4.1.4 大肠菌群测定4.1.4.1在一定培养条件下能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌。4.1.4.2 培养基和试剂（1） 月桂基硫酸盐胰蛋白胨（Lauryl Sulfate Tryptose，LST）肉汤： 胰蛋白胨或胰酪胨 20.0 g氯化钠 5.0 g乳糖 5.0 g磷酸氢二钾（K2HPO4） 2.75 g磷酸二氢钾（KH2PO4） 2.75 g月桂基硫酸钠 0.1 g蒸馏水 1 000 mLpH 6.80.2将上述成分溶解于蒸馏水中，调节 pH。分装到有玻

14、璃小倒管的试管中，每管10 mL。121 高压灭菌15 min。（2） 煌绿乳糖胆盐（BGLB）肉汤：蛋白胨 10.0 g乳糖 10.0 g牛胆粉（oxgall或oxbile）溶液 200 mL0.1%煌绿水溶液 13.3 mL蒸馏水 800 mLpH 7.20.1将蛋白胨、乳糖溶于约500 mL蒸馏水中，加入牛胆粉溶液200 mL（将20.0 g脱水牛胆粉溶于200 mL蒸馏水中，调节pH至7.07.5），用蒸馏水稀释到975 mL，调节pH，再加入0.1%煌绿水溶液13.3 mL，用蒸馏水补足到1 000 mL，用棉花过滤后，分装到有玻璃小倒管的试管中，每管10 mL。121 高压灭菌15

15、 min。（4） 结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA）：A.3.1 成分蛋白胨 7.0 g酵母膏 3.0 g乳糖 10.0 g氯化钠 5.0 g胆盐或3号胆盐 1.5 g中性红 0.03 g结晶紫 0.002 g琼脂 15 g18 g蒸馏水 1 000 mLpH 7.40.1将上述成分溶于蒸馏水中，静置几分钟，充分搅拌，调节pH。煮沸2 min，将培养基冷却至45 50 倾注平板。使用前临时制备，不得超过3 h。（4） 磷酸盐缓冲液磷酸二氢钾（KH2PO4） 34.0 g蒸馏水 500 mLpH 7.2A.4.2 制法贮存液：称取34.0 g的磷酸二氢钾溶于500 mL蒸馏水中，用大约175 mL

16、的1 mol/L氢氧化钠溶液调节pH，用蒸馏水稀释至1 000 mL后贮存于冰箱。稀释液：取贮存液1.25 mL，用蒸馏水稀释至1 000 mL，分装于适宜容器中，121 高压灭菌15 min。（5）无菌生理盐水氯化钠 8.5 g蒸馏水 1 000 mL称取8.5氯化钠溶于1 000 mL蒸馏水中，121 高压灭菌15 min。（6）mol/L NaOHNaOH 40.0 g蒸馏水 1000 mL称取40 g氢氧化钠溶于1 000 mL蒸馏水中，121 高压灭菌15 min。（7） mol/L HClHCl 90 mL蒸馏水 1 000 mL移取浓盐酸90 mL，用蒸馏水稀释至1 000 mL

17、，121 高压灭菌15 min。4.1.4.3 检验程序MPN计数法4.1.4.4 操作步骤（1） 样品的稀释固体和半固体样品：称取25 g 样品,放入盛有225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内,8000 r/min10000 r/min 均质1 min2 min,或放入盛有225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min2 min，制成1:10 的样品匀液。液体样品：以无菌吸管吸取25 mL 样品置盛有225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1:10 的样品匀液。 样品匀液的pH 值应在6.

18、57.5 之间，必要时分别用1 mol/L NaOH 或1 mol/L HCl 调节。 用1 mL 无菌吸管或微量移液器吸取1:10 样品匀液1 mL，沿管壁缓缓注入9 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用1 支1 mL 无菌吸管反复吹打，使其混合均匀，制成1:100 的样品匀液。 根据对样品污染状况的估计，按上述操作，依次制成十倍递增系列稀释样品匀液。每递增稀释1 次，换用1 支1 mL 无菌吸管或吸头。从制备样品匀液至样品接种完毕，全过程不得超过15 min。（2） 初发酵试验每个样品，选择3个适宜的连续稀释度的样品匀液（液体样品可

19、以选择原液），每个稀释度接种3管月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤，每管接种1mL（如接种量超过1 mL，则用双料LST肉汤），361 培养24 h2 h，观察倒管内是否有气泡产生，24 h2 h产气者进行复发酵试验，如未产气则继续培养至48 h2 h，产气者进行复发酵试验。未产气者为大肠菌群阴性。（3） 复发酵试验用接种环从产气的LST肉汤管中分别取培养物1环，移种于煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB）管中，36 1培养48 h2 h，观察产气情况。产气者，计为大肠菌群阳性管。（4） 大肠菌群最可能数（MPN）的报告按（3）确证的大肠菌群LST阳性管数，检索MPN表报告每g（mL）样品中大肠菌群的M

20、PN值。4.1.4.5 检验程序大肠菌群平板计数法4.1.4.6 操作步骤（1） 样品的稀释按4.1.4.4 （1）进行。（2） 平板计数 选取2个3个适宜的连续稀释度, 每个稀释度接种2个无菌平皿，每皿1 mL。同时取1 mL生理盐水加入无菌平皿作空白对照。及时将15 mL20 mL冷至46 的结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA）约倾注于每个平皿中。小心旋转平皿，将培养基与样液充分混匀，待琼脂凝固后，再加3 mL4 mLVRBA覆盖平板表层。翻转平板，置于36 1 培养18 h24 h。（3） 平板菌落数的选择选取菌落数在15 CFU150 CFU 之间的平板，分别计数平板上出现的典型和可疑大肠

21、菌群菌落。典型菌落为紫红色，菌落周围有红色的胆盐沉淀环，菌落直径为0.5 mm 或更大。（4）证实试验从VRBA 平板上挑取10 个不同类型的典型和可疑菌落，分别移种于BGLB 肉汤管内，36 1 培养24 h48 h，观察产气情况。凡BGLB 肉汤管产气，即可报告为大肠菌群阳性。（5）大肠菌群平板计数的报告经最后证实为大肠菌群阳性的试管比例乘以8.3中计数的平板菌落数，再乘以稀释倍数，即为每g（mL）样品中大肠菌群数。4.1.5 沙门氏菌测定4.1.5.1 培养基和试剂（1）缓冲蛋白胨水（BPW）：蛋白胨 10.0 g氯化钠 5.0 g磷酸氢二钠（含12 个结晶水） 9.0 g磷酸二氢钾 1

22、.5 g蒸馏水 1 000 mLpH 7.20.2将各成分加入蒸馏水中，搅混均匀，静置约10 min，煮沸溶解，调节pH，高压灭菌121 ，15min。（2）四硫磺酸钠煌绿（TTB）增菌液： 基础液蛋白胨 10.0 g牛肉膏 5.0 g氯化钠 3.0 g碳酸钙 45.0 g蒸馏水 1 000 mLpH 7.00.2除碳酸钙外，将各成分加入蒸馏水中，煮沸溶解，再加入碳酸钙，调节pH，高压灭菌121 ，20 min。硫代硫酸钠溶液硫代硫酸钠（含5 个结晶水） 50.0 g蒸馏水 加至100 mL高压灭菌121 ，20 min。 碘溶液碘 片 20.0 g碘化钾 25.0 g蒸馏水 100 mL将碘

23、化钾充分溶解于少量的蒸馏水中，再投入碘片，振摇玻瓶至碘片全部溶解为止，然后加蒸馏水至规定的总量，贮存于棕色瓶内，塞紧瓶盖备用。 0.5煌绿水溶液煌绿 0.5 g蒸馏水 100 mL溶解后，存放暗处，不少于1d，使其自然灭菌。 牛胆盐溶液牛胆盐 10.0 g蒸馏水 100 mL加热煮沸至完全溶解，高压灭菌121 ，20 min。 制法基础液 900 mL硫代硫酸钠溶液 100 mL碘溶液 20.0 mL煌绿水溶液 2.0 mL牛胆盐溶液 50.0 mL临用前，按上列顺序，以无菌操作依次加入基础液中，每加入一种成分，均应摇匀后再加入另一种成分。（3）亚硒酸盐胱氨酸（SC）增菌液蛋白胨 5.0 g乳

24、糖 4.0 g磷酸氢二钠 10.0 g亚硒酸氢钠 4.0 gL-胱氨酸 0.01 g蒸馏水 1 000 mLpH 7.00.2除亚硒酸氢钠和L-胱氨酸外，将各成分加入蒸馏水中，煮沸溶解，冷至55 以下，以无菌操作加入亚硒酸氢钠和1 g/L L-胱氨酸溶液10 mL（称取0.1 g L-胱氨酸，加1 mol/L 氢氧化钠溶液15 mL，使溶解，再加无菌蒸馏水至100 mL 即成，如为DL-胱氨酸，用量应加倍）。摇匀，调节pH。（4）亚硫酸铋（BS）琼脂：蛋白胨 10.0 g牛肉膏 5.0 g葡萄糖 5.0 g硫酸亚铁 0.3 g磷酸氢二钠 4.0 g煌 绿 0.025 g 或5.0gL 水溶液5

25、.0mL柠檬酸铋铵 2.0 g亚硫酸钠 6.0 g琼 脂 18.0 g20 g蒸馏水 1 000 mLpH 7.50.2将前三种成分加入300 mL 蒸馏水（制作基础液），硫酸亚铁和磷酸氢二钠分别加入20 mL 和30mL 蒸馏水中，柠檬酸铋铵和亚硫酸钠分别加入另一20 mL 和30 mL 蒸馏水中，琼脂加入600 mL 蒸馏水中。然后分别搅拌均匀，煮沸溶解。冷至80 左右时，先将硫酸亚铁和磷酸氢二钠混匀，倒入基础液中，混匀。将柠檬酸铋铵和亚硫酸钠混匀，倒入基础液中，再混匀。调节pH，随即倾入琼脂液中，混合均匀，冷至50 55 。加入煌绿溶液，充分混匀后立即倾注平皿。注：本培养基不需要高压灭菌

26、，在制备过程中不宜过分加热，避免降低其选择性，贮于室温暗处，超过48 h 会降低其选择性，本培养基宜于当天制备，第二天使用。（5） HE 琼脂（Hektoen Enteric Agar）：蛋白胨 12.0 g牛肉膏 3.0 g乳糖 12.0 g蔗糖 12.0 g水杨素 2 .0 g胆盐 20.0 g氯化钠 5.0 g琼脂 18.0 g20.0 g蒸馏水 1 000 mL0.4溴麝香草酚蓝溶液 16.0 mLAndrade 指示剂 20.0 mL甲液 20.0 mL乙液 20.0 mLpH 7.50.2将前面七种成分溶解于400 mL 蒸馏水内作为基础液;将琼脂加入于600 mL 蒸馏水内。然后

27、分别搅拌均匀，煮沸溶解。加入甲液和乙液于基础液内,调节pH。再加入指示剂,并与琼脂液合并,待冷至50 55 倾注平皿。注:本培养基不需要高压灭菌，在制备过程中不宜过分加热，避免降低其选择性。甲液的配制硫代硫酸钠 34.0 g柠檬酸铁铵 4.0 g蒸馏水 100 mL乙液的配制去氧胆酸钠 10.0 g蒸馏水 100 mL Andrade 指示剂酸性复红 0.5 g1mol/L 氢氧化钠溶液 16.0 mL蒸馏水 100 mL将复红溶解于蒸馏水中,加入氢氧化钠溶液。数小时后如复红褪色不全,再加氢氧化钠溶液1mL2 mL。（6） 木糖赖氨酸脱氧胆盐（XLD）琼脂：酵母膏 3.0 gL-赖氨酸 5.0

28、 g木糖 3.75 g乳糖 7.5 g蔗糖 7.5 g去氧胆酸钠 2.5 g柠檬酸铁铵 0.8 g硫代硫酸钠 6.8 g氯化钠 5.0 g琼脂 15.0 g酚红 0.08 g蒸馏水 1 000 mLpH 7.40.2除酚红和琼脂外，将其他成分加入400 mL 蒸馏水中，煮沸溶解，调节pH。另将琼脂加入600 mL蒸馏水中，煮沸溶解。将上述两溶液混合均匀后，再加入指示剂，待冷至50 55 倾注平皿。注:本培养基不需要高压灭菌，在制备过程中不宜过分加热，避免降低其选择性，贮于室温暗处。本培养基宜于当天制备，第二天使用。（7） 三糖铁（TSI）琼脂：蛋白胨 20.0 g牛肉膏 5.0 g乳 糖 10

29、.0 g蔗 糖 10.0 g葡萄糖 1.0 g硫酸亚铁铵（含6 个结晶水） 0.2 g酚 红 0.025 g 或5.0 g/L 溶液5.0 mL氯化钠 5.0 g硫代硫酸钠 0.2 g琼 脂 12.0 g蒸馏水 1 000 mLpH 7.40.2除酚红和琼脂外，将其他成分加入400 mL 蒸馏水中，煮沸溶解，调节pH。另将琼脂加入600 mL蒸馏水中，煮沸溶解。将上述两溶液混合均匀后，再加入指示剂，混匀，分装试管，每管约2 mL4 mL，高压灭菌121 10 min 或115 15 min，灭菌后置成高层斜面，呈桔红色。（8）蛋白胨水、靛基质试剂： 蛋白胨水蛋白胨（或胰蛋白胨） 20.0 g氯

30、化钠 5.0 g蒸馏水 1 000 mLpH 7.40.2将上述成分加入蒸馏水中，煮沸溶解，调节pH，分装小试管,121 高压灭菌15 min。 靛基质试剂柯凡克试剂：将5 g 对二甲氨基甲醛溶解于75 mL 戊醇中,然后缓慢加入浓盐酸25 mL。欧-波试剂：将1 g 对二甲氨基苯甲醛溶解于95 mL95乙醇内。然后缓慢加入浓盐酸20mL。 试验方法挑取小量培养物接种,在36 1 培养1 d2 d，必要时可培养4 d5 d。加入柯凡克试剂约0.5 mL，轻摇试管,阳性者于试剂层呈深红色；或加入欧-波试剂约0.5 mL，沿管壁流下，覆盖于培养液表面,阳性者于液面接触处呈玫瑰红色。注：蛋白胨中应含

31、有丰富的色氯酸。每批蛋白胨买来后，应先用已知菌种鉴定后方可使用。（9） 尿素琼脂（pH 7.2）：蛋白胨 1.0 g氯化钠 5.0 g葡萄糖 1.0 g磷酸二氢钾 2.0 g0.4酚 红 3.0 mL琼 脂 20.0 g蒸馏水 1 000 mL20%尿素溶液 100 mLpH7.20.2除尿素、琼脂和酚红外，将其他成分加入400 mL 蒸馏水中，煮沸溶解，调节pH。另将琼脂加入600 mL 蒸馏水中，煮沸溶解。将上述两溶液混合均匀后，再加入指示剂后分装，121 高压灭菌15 min。冷至50 55 ,加入经除菌过滤的尿素溶液。尿素的最终浓度为2。分装于无菌试管内，放成斜面备用。试验方法挑取琼脂

32、培养物接种,在36 1 培养24 h，观察结果。尿素酶阳性者由于产碱而使培养基变为红色。（10） 氰化钾 （KCN） 培养基：蛋白胨 10.0 g氯化钠 5.0 g磷酸二氢钾 0.225 g磷酸氢二钠 5.64 g蒸馏水 1 000 mL0.5氰化钾 20.0 mL将除氰化钾以外的成分加入蒸馏水中，煮沸溶解，分装后121 高压灭菌15 min。放在冰箱内使其充分冷却。每100 mL 培养基加入0.5氰化钾溶液2.0 mL（最后浓度为1:10 000），分装于无菌试管内,每管约4 mL,立刻用无菌橡皮塞塞紧,放在4 冰箱内,至少可保存两个月。同时，将不加氰化钾的培养基作为对照培养基,分装试管备用

33、。试验方法将琼脂培养物接种于蛋白胨水内成为稀释菌液，挑取1 环接种于氰化钾（KCN）培养基。并另挑取1 环接种于对照培养基。在36 1 培养1 d2 d，观察结果。如有细菌生长即为阳性（不抑制），经2 d 细菌不生长为阴性（抑制）。注:氰化钾是剧毒药,使用时应小心，切勿沾染，以免中毒。夏天分装培养基应在冰箱内进行。试验失败的主要原因是封口不严,氰化钾逐渐分解，产生氢氰酸气体逸出，以致药物浓度降低，细菌生长，因而造成假阳性反应。试验时对每一环节都要特别注意。（11） 赖氨酸脱羧酶试验培养基：蛋白胨 5.0 g酵母浸膏 3.0 g葡萄糖 1.0 g蒸馏水 1 000 mL1.6溴甲酚紫-乙醇溶液

34、1.0 mLL-赖氨酸或DL-赖氨酸 0.5 g/100 mL 或1.0 g/100 mLpH 6.80.2除赖氨酸以外的成分加热溶解后,分装每瓶100 mL，分别加入赖氨酸。L-赖氨酸按0.5加入，DL-赖氨酸按1加入。调节pH。对照培养基不加赖氨酸。分装于无菌的小试管内，每管0.5 mL，上面滴加一层液体石蜡，115 高压灭菌10 min。试验方法从琼脂斜面上挑取培养物接种，于36 1 培养18 h24 h，观察结果。氨基酸脱羧酶阳性者由于产碱，培养基应呈紫色。阴性者无碱性产物，但因葡萄糖产酸而使培养基变为黄色。对照管应为黄色。（12）糖发酵管：牛肉膏 5.0 g蛋白胨 10.0 g氯化钠

35、 3.0 g磷酸氢二钠（含12 个结晶水） 2.0 g0.2溴麝香草酚蓝溶液 12.0 mL蒸馏水 1 000 mLpH 7.40.2 葡萄糖发酵管按上述成分配好后，调节pH。按0.5加入葡萄糖，分装于有一个倒置小管的小试管内，121 高压灭菌15 min。 其他各种糖发酵管可按上述成分配好后,分装每瓶100 mL，121 高压灭菌15 min。另将各种糖类分别配好10溶液，同时高压灭菌。将5 mL 糖溶液加入于100 mL 培养基内，以无菌操作分装小试管。注：蔗糖不纯,加热后会自行水解者，应采用过滤法除菌。试验方法从琼脂斜面上挑取小量培养物接种，于36 1 培养,一般2 d3 d。迟缓反应需

36、观察14 d30 d。（13） ONPG 培养基：邻硝基酚-D 半乳糖苷（ONPG）60.0 mg0.01mol/L 磷酸钠缓冲液（pH7.5） 10.0 mL1蛋白胨水（pH7.5） 30.0 mL将ONPG 溶于缓冲液内，加入蛋白胨水，以过滤法除菌，分装于无菌的小试管内，每管0.5 mL，用橡皮塞塞紧。试验方法自琼脂斜面上挑取培养物1 满环接种于36 1 培养1 h3 h 和24 h 观察结果。如果-半乳糖苷酶产生，则于1 h3 h 变黄色，如无此酶则24 h 不变色。（14） 半固体琼脂牛肉膏 0.3 g蛋白胨 1.0 g氯化钠 0.5 g琼脂 0.35g0.4 g蒸馏水 100 mLp

37、H 7.40.2按以上成分配好,煮沸溶解,调节pH。分装小试管。121 高压灭菌15 min。直立凝固备用。注:供动力观察、菌种保存、H 抗原位相变异试验等用。（15） 丙二酸钠培养基酵母浸膏 1.0 g硫酸铵 2.0 g磷酸氢二钾 0.6 g磷酸二氢钾 0.4 g氯化钠 2.0 g丙二酸钠 3.0 g0.2溴麝香草酚蓝溶液 12.0 mL蒸馏水 1 000 mLpH 6.80.2除指示剂以外的成分溶解于水，调节pH，再加入指示剂，分装试管，121 高压灭菌15 min。试验方法用新鲜的琼脂培养物接种，于36 1 培养48 h，观察结果。阳性者由绿色变为蓝色。（16） 沙门氏菌O 和H 诊断血

38、清。（17） 生化鉴定试剂盒。（18）沙门氏菌属显色培养基。4.1.5.2 检验程序4.1.5.3 操作步骤（1）前增菌称取25 g（mL）样品放入盛有225 mL BPW 的无菌均质杯中，以8 000 r/min10 000 r/min 均质1 min2 min，或置于盛有225 mL BPW 的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min2 min。若样品为液态，不需要均质，振荡混匀。如需测定pH 值，用1 mol/mL 无菌NaOH 或HCl 调pH 至6.80.2。（2）增菌轻轻摇动培养过的样品混合物，移取1 mL，转种于10 mL TTB 内，于42 1 培养18 h24h。同时，另取

39、1 mL，转种于10 mL SC 内，于36 1 培养18 h24 h。（3） 分离分别用接种环取增菌液1 环，划线接种于一个BS 琼脂平板和一个XLD 琼脂平板（或HE 琼脂平板或沙门氏菌属显色培养基平板）。于36 1 分别培养18 h24 h （XLD 琼脂平板、HE 琼脂平板、沙门氏菌属显色培养基平板） 或40 h48 h （BS 琼脂平板），观察各个平板上生长的菌落,各个平板上的菌落特征见表1。（4） 生化试验 自选择性琼脂平板上分别挑取2 个以上典型或可疑菌落，接种三糖铁琼脂，先在斜面划线，再于底层穿刺；接种针不要灭菌,直接接种赖氨酸脱羧酶试验培养基和营养琼脂平板，于36 1 培养1

40、8 h24 h，必要时可延长至48 h。在三糖铁琼脂和赖氨酸脱羧酶试验培养基内，沙门氏菌属的反应结果见表2。 接种三糖铁琼脂和赖氨酸脱羧酶试验培养基的同时,可直接接种蛋白胨水 （供做靛基质试验）、尿素琼脂 （pH7.2）、氰化钾 （KCN） 培养基，也可在初步判断结果后从营养琼脂平板上挑取可疑菌落接种。于36 1 培养18 h24 h，必要时可延长至48 h，按下表判定结果。将已挑菌落的平板储存于2 5 或室温至少保留24 h，以备必要时复查。 反应序号A1：典型反应判定为沙门氏菌属。如尿素、KCN 和赖氨酸脱羧酶3项中有1项异常，按表4可判定为沙门氏菌。 如有2 项异常为非沙门氏菌。 反应序

41、号A2：补做甘露醇和山梨醇试验，沙门氏菌靛基质阳性变体两项试验结果均为阳性，但需要结合血清学鉴定结果进行判定。反应序号A3：补做ONPG。ONPG 阴性为沙门氏菌，同时赖氨酸脱羧酶阳性,甲型副伤寒沙门氏菌为赖氨酸脱羧酶阴性。 必要时按表5进行沙门氏菌生化群的鉴别。(5) 血清学鉴定 抗原的准备一般采用1.21.5琼脂培养物作为玻片凝集试验用的抗原。O 血清不凝集时，将菌株接种在琼脂量较高的 （如23） 培养基上再检查；如果是由于Vi 抗原的存在而阻止了O 凝集反应时，可挑取菌苔于1 mL 生理盐水中做成浓菌液，于酒精灯火焰上煮沸后再检查。H 抗原发育不良时，将菌株接种在0.550.65半固体琼

42、脂平板的中央，俟菌落蔓延生长时，在其边缘部分取菌检查；或将菌株通过装有0.30.4半固体琼脂的小玻管1 次2次，自远端取菌培养后再检查。 多价菌体抗原（O）鉴定在玻片上划出2 个约1 cm2 cm 的区域，挑取1 环待测菌，各放1/2 环于玻片上的每一区域上部，在其中一个区域下部加1 滴多价菌体（O）抗血清，在另一区域下部加入1 滴生理盐水，作为对照。再用无菌的接种环或针分别将两个区域内的菌落研成乳状液。将玻片倾斜摇动混合1 min，并对着黑暗背景进行观察，任何程度的凝集现象皆为阳性反应。 多价鞭毛抗原（H）鉴定同。 血清学分型（选做项目） O 抗原的鉴定用AF 多价O 血清做玻片凝集试验，同

43、时用生理盐水做对照。在生理盐水中自凝者为粗糙形菌株，不能分型。被AF 多价O 血清凝集者，依次用O4；O3、O10；O7；O8；O9；O2 和O11 因子血清做凝集试验。根据试验结果，判定O 群。被O3、O10 血清凝集的菌株，再用O10、O15、O34、O19 单因子血清做凝集试验，判定E1、E2、E3、E4 各亚群，每一个O 抗原成分的最后确定均应根据O 单因子血清的检查结果，没有O 单因子血清的要用两个O 复合因子血清进行核对。不被AF 多价O 血清凝集者，先用9 种多价O 血清检查，如有其中一种血清凝集，则用这种血清所包括的O 群血清逐一检查，以确定O 群。每种多价O 血清所包括的O

44、因子如下：O 多价1 A，B，C，D，E，F，群 （并包括6,14 群）O 多价2 13，16，17，18，21 群O 多价3 28，30，35，38，39 群O 多价4 40，41，42，43 群O 多价5 44，45，47，48 群O 多价6 50，51，52，53 群O 多价7 55，56，57，58 群O 多价8 59，60，61，62 群O 多价9 63，65，66，67 群 H 抗原的鉴定属于AF 各O 群的常见菌型，依次用表6 所述H 因子血清检查第1 相和第2 相的H 抗原。每一个H 抗原成分的最后确定均应根据H 单因子血清的检查结果，没有H 单因子血清的要用两个H 复合因子血清进行核对。检出第1 相H 抗原而未检出第2 相H 抗原的或检出第2 相H 抗