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1、精选优质文档-倾情为你奉上08 检疫 HapyWu尿中氨基酮戊酸(ALA)的测定一、 实验目的学会用乙酸乙酯萃取对二氨基苯甲醛比色法测定尿中氨基酮戊酸(ALA)的含量，从而了解铅吸收和铅中毒的诊断。二、 实验原理在PH为4.6及温度为100的条件下，ALA与乙酰乙酸乙酶缩合生成吡咯化合物。此化合物用乙酸乙酯提取，并与显示剂（对二甲氨基苯甲醛）作用生成红色化合物，根据颜色深浅进行比色定量。三、 实验步骤1. 标准曲线的绘制 取具赛比色管10ml6支，按下表配置标准色列：试剂 0 1 2 3 4 5 ALA标准应用液（ml）0.0 0.1 0.3 0.5 0.7 1.0水（ml）2.0 1.9 1
2、.7 1.5 1.3 1.0ALA含量（ug)0 1 3 5 7 10A. 各管中加入2ml乙酸缓冲液，0.4ml乙酰乙酸乙酯，混匀，于沸水中加热10分钟，取出冷至室温。B. 各管加入4ml 乙酸乙酯，加塞振摇1分钟，离心5分钟、取出静置分层。C. 各取乙酸乙酯提取液2ml于另外6支管中，各管加入2ml显色剂，加塞振摇，静置10分钟。D. 用分光光度计（波长554），以零管作参比，测其吸光度。根据ALA浓度与吸光度的关系绘制标准曲线。2. 尿样测定A.预先测定尿液比重，测得尿样比重为1.010。B.分别取1ml尿样于两支上述一样的管内，各加入水1ml，乙酸缓冲液2ml,混匀。其一为样品管，另一
3、为空白管。向样品管中家兔0.4ml乙酰乙酸乙酯，空白管中加入0.4乙酸缓冲液，充分混匀，同时置沸水浴中加热10分钟，取出冷至室温。C.按标曲绘制的BD进行，以乙酸乙酯作参比，进行比色定量。四实验结果与计算1.标准曲线绘制管号012345ALA含量（ug)0135710吸光度A00.0540.1520.2420.2880.4792. 尿样结果 空白管为0.022，样品管为0.110。 带入标准曲线查得样品管中ALA含量为1.83ug。 根据尿样比重为1.010，在正常范围内，故尿中ALA（mg/L)=样品管中ALA含量（ug) =1.83mg/L五 实验结论 根据铅实验室检测指标值，尿中氨基酮戊
4、酸(ALA)的诊断值为8mg/L，因此本实验所用的尿样样品未超标。六实验讨论1.进行比色定量时，为什么样品测定时用乙酸乙酯作参比？原因是标准曲线用的是应用液，可以用零管参比，而测定管中的最大容积为乙酸乙酯，为了最大限度的消除背景吸收等带来的误差，因此选择乙酸乙酯作为参比。2. 若鸟样比重不在正常的范围内，测的结果应如何计算 此时应先进行校正，采用公式：尿中ALA（mmol/L）=样品管含量（ug） * 1.030-1.000 * 0.0076 1（尿样） 尿比重-1.000 3. 实验过程中应注意哪些 在处理数据时，应返回检测一下数据结果是否在此方法的线性范围内，否则会影响实验的准确度；同时因为所用的试剂为有机溶剂，易分解，最好采用近期产品，显色剂宜新鲜配制；取样时应准确量取；离心过程中应注意配平；加入显色剂后应在半个小时内完成比色。专心-专注-专业