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1、精选优质文档-倾情为你奉上紫外圆二色谱分析蛋白结构根据电子跃迁能级能量的大小，蛋白质的CD光谱分为三个波长范围: (1) 250nm以下的远紫外光谱区，圆二色性主要由肽键的电子跃迁引起;(2) 250300nm的近紫外光谱区，主要由侧链芳香基团的电子跃迁引起; (3) 300700nm的紫外-可见光光谱区，主要由蛋白质辅基等外在生色基团引起。相应地，远紫外CD主要用于蛋白质二级结构的解析，近紫外CD主要揭示蛋白质的三级结构信息，紫外-可见光CD主要用于辅基的偶合分析。远紫外CD谱:在蛋白质或多肽的规则二级结构中，肽键是高度有规律排列的，二级结构不同的蛋白质或多肽，所产生CD谱带的位置、峰的强弱
2、都不同。因此，根据所测得蛋白质或多肽的远紫外CD谱，能反映出蛋白质或多肽链二级结构的信息。紫外区段（190-240nm），-螺旋的CD谱在192nm附近有一正峰，在208nm、222nm处呈两个负的特征肩峰；-折叠在216-218nm有一负峰，在185-200nm有一强的正峰；-转角则在 206nm附近有一正峰；无规则卷曲构象的CD谱在198nm附近有一负峰，在220nm附近有一小而宽的正峰。近紫外CD光谱：蛋白质中芳香氨基酸残基，如色氨酸(Trp)、酪氨酸(Tyr)、苯丙氨酸(Phe)及二硫键处于不对称微环境时，在近紫外区250320nm表现出CD峰。研究表明：色氨酸在290及305nm处有
3、精细的特征峰；酪氨酸在275及282nm有峰；苯丙氨酸在255、260及270 nm有弱的但比较尖锐的峰带；另外芳香氨基酸残基在远紫外光谱区也有CD信号；二硫键于195-200nm和250-260处有谱峰?。总的来说，在250280nm之间，由于芳香氨酸残基的侧链的谱峰常因微区特征的不同而改变，不同谱峰之间可能产生重叠。蛋白浓度与使用的光径厚度和测量区域有一定关系，测量远紫外区氨基酸残基微环境的蛋白，浓度范围在0.11.0mg/ml，则光径可选择在0.10.2cm之间，溶液体积则在200500ul。而测量近紫外区的蛋白三级结构，所需浓度要至少比远紫外区的浓10倍方能检测到有效信号，且一般光径的选择均在0.21.0cm，相应的体积也需增加至12mL。缓冲液可选50100mmol Tris-HCl、PBS等，尽量除去EDTA。）测蛋白二级结构的CD峰图中，在正常条件下，正峰或负峰都趋向于最大正/负峰值。图6中由于外界条件（温度）不断升高，导致蛋白的二级结构逐渐被破坏，峰值逐渐向0靠近，趋于平缓。专心-专注-专业