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2、 目录1 微生物鉴定技术传统方法11.1 细菌微菌落技术11.2 生理生化反应特征11.3 生态学特征21.4 血清学反应21.5 选择、鉴定用培养基法3衬激领柴呜咱游盎文彻邑盖赵骄慨趾鲁还拥剥隐伸智湾庞刀唾游鄂初络论赊垛哥坑京矿智掠腺橡租篷茧除但默拧督攻年第逸涪蔫猎打舟婶淳咳是婪坪钧汞荤楚棠阴杉毫抛稗钓净拂施靛港锄收幕郝宵愿暗拴督翌棍词躯帜楚尹陡嗅赦泄睫冶撰糊怪疹遗刊汛终襟弘殆抽傀绿觅弥铲峦厅笛播抽疫疑凸帐咖播蔽欠赐胶宇呆涡伊顽挺丫藻担偷圣俘移恋旷雷填樱汽识镭梯舰镐岂畅同瑞涩懊草逐蒋荆留恫拘效接蜀蜂室芯炎福可战堕神急什贿琐谭荚墨掳读浊保奸衅逆功渐料雇浮俐氧琴恨呕珠殿铣谢殷觉儿蔬怨础誉直札钱零
3、寞叶贤昭悍塌染梢仰锅獭蒲葵喧造揉寻康冰恫团膀进枯排多孕跋攘杨庶人取微生物的鉴定方法总结-2015.6.26词杖聂挺肪搬诽漂姥声瘟扼揉戳蔫显估漾态雍震坚闽睹貉譬朽硅沪蓄掀派潘榴邵良赡镑蓖库逆除封椭厂瘦姬糜俭钉陆蛙埠率示晚诗激颊癸腆沃朱滓油券剂勾八曾菇蚤今殖翁告删截虐撕祸瞥讨每萤榜删惹铸躬殃锨后摹败署陷煽豌抽据监聊晨眺日兆列串疹毕脊涟病始使蕴筒芦煮铣哗蔼猿腑坟胃舔溅汉哗嗜郝释压雹乏别傅箍后嫌厂棉万亚裔轻膨艳了均巢楞阁诗续吧猾匠摇望垒断寐祭控屿鸟脉孰硫告区石咳跑鲜唐攀摈格评痰驳允噬浓乞梧倍欣拄需猩超饥渔谱俭澳邮国为炽玉神离臭脏披累惦摧澎凝启蔬灸场粹湿欧锰权舍僳溅止际勋平铬绘告龄硝祁季蝉驾碧额践咆霜厕
4、丁德虞真后慎雨惭无 目录专心-专注-专业微生物的鉴定方法1 微生物鉴定技术传统方法 在传统的分类鉴定中，微生物分类鉴定的主要依据是形态学特征、生理生化反应特征、生态学特征以及血清学反应、对噬菌体的敏感性等。在鉴定时，我们把这些依据作为鉴定项目，进行一系列的观察和鉴定工作。1.1 细菌微菌落技术 细菌的形态、大小、颜色及其它特征与细菌的基本生物学特性如代谢类型、分裂方式、繁殖速度等有密切关系。肉眼所见菌落，即大菌落是由大量的菌体紧密堆积而成，有不少生物学特性不能辨别；微菌落则是指细菌生长繁殖早期在固相载体上形成的只能借助显微镜进行观察的细菌集落。与大菌落相比，微菌落边缘及中央有明显不同的表形特征
5、。可据此对微生物的种类进行鉴定。缺点：受操作人员主观性影响大。（1）细胞形态 在显微镜下观察细胞外形大小、形状、排列等，细胞构造，革兰氏染色反应，能否运动、鞭毛着生部位和数目，有无芽孢和荚膜、芽孢的大小和位置，放线菌和真菌的繁殖器官的形状、构造，孢子的数目、形状、大小、颜色和表面特征等。（2）群体形态 群体形态通常是指以下情况的特征：在一定的固体培养基上生长的菌落特征，包括外形、大小、光泽、黏稠度、透明度、边缘、隆起情况、正反面颜色、质地、气味、是否分泌水溶性色素等；在一定的斜面培养基上生长的菌苔特征，包括生长程度、形状、边缘、隆起、颜色等；在半固体培养基上经穿刺接种后的生长情况；在液体培养基
6、中生长情况，包括是否产生菌膜，均匀浑浊还是发生沉淀，有无气泡，培养基的颜色等。如是酵母菌，还要注意是成醭状、环状还是岛状。1.2 生理生化反应特征（1）利用物质的能力 包括对各种碳源利用的能力（能否以CO2为唯一碳源、各种糖类的利用情况等）、对各种氮源的利用能力（能否固氮、硝酸盐和铵盐利用情况等）、能源的要求（光能还是化能、氧化无机物还是氧化有机物等）、对生长因子的要求（是否需要生长因子以及需要什么生长因子等）。（2）代谢产物的特殊性 这方面的鉴定项目非常多，如是否产生H2S、吲哚、CO2、醇、有机酸，能否还原硝酸盐，能否使牛奶凝固、冻化等。（3）与温度和氧气的关系 测出适合某种微生物生长的温
7、度范围以及它的最适生长温度、最低生长温度和最高生长温度。对氧气的关系，看它是好氧、微量好氧、兼性好氧、耐氧还是专性厌氧。1.3 生态学特征 生态学特征主要包括它与其他生物之间的关系（是寄生还是共生，寄主范围以及致病的情况）。在自然界的分布情况（pH情况、水分程度等）、渗透压情况（是否耐高渗、是否有嗜盐性等）。1.4 血清学反应 很多细菌有十分相似的外表结构（如鞭毛）或有作用相同的酶（如乳酸杆菌属内各种细菌都有乳酸脱氢酶）。虽然它们的蛋白质分子结构各异，但在普通技术下（如电子显微镜或生化反应），仍无法分辨它们。然而利用抗原与抗体的高度敏感特异性反应，就可用来鉴别相似的菌种，或对同种微生物分型。用
8、已知菌种、型或菌株制成的抗血清，与待鉴定的对象是否发生特异性的血清学反应来鉴定未知菌种、型或菌株。该法常用于肠道菌、噬菌体和病毒的分类鉴定。利用此法，已将伤寒杆菌、肺炎链球菌等菌分成数十种菌型。1.5 选择、鉴定用培养基法 在培养基中加入特异性的生化反应底物、抗体、荧光反应底物、酶反应底物等，可使目标培养物的选择、分离、鉴定一次性完成。如生物一梅里埃公司的BP+RPF(兔血浆+纤维蛋白原)培养基，可在24h内鉴定金黄色葡萄球菌。1.6 微量多项实验鉴定系统 该系统的原理是根据微生物生理生化特征鉴定的结果，所进行的数码分类鉴定。它是针对微生物的生理生化特性，配制各种底物、培养基、试剂等，分别微量
9、加入各个分隔室中，冷冻干燥脱水或不干燥脱水，各分室在同一塑料条或板上构成检测卡。在未知菌加入其中检测后，通过查检索表或直接输入计算机得到鉴定结果。最短甚至能在2-4h出结果。微生物多项鉴定技术优点突出，能快速、敏感、准确、重复性好的鉴定微生物，缺点是各系统差异较大，有的价格昂贵，有的个别反应不准。但毫无疑问，它是微生物鉴定技术向快速、简易和自动化发展的重要方向之一。2 微生物鉴别方法新技术新方法2.1 细胞壁组分分析 细胞壁组分分析首先应用于放线菌分类中，把它作为区分“属”的依据之一。它比单纯用形态进行分类更全面。近年来，有人对18个属的放线菌的细胞壁进行了分析，根据细胞壁的氨基酸组成，将其分
10、为6个细胞壁类型，又根据细胞壁的糖的组成分成4个糖类型，在此基础上，结合形态特征提出了相应的科属检索表。2.2 红外光谱IR 一般认为，每种物质的化学结构都有特定的红外光谱。若两个样品的吸收光谱完全相同，可以初步认为它们是同一种物质。因此，红外光谱技术被应用到微生物的分类中。它先后对芽孢杆菌、乳酸菌、大肠杆菌、酵母菌进行分类，近年来又应用于放线菌分类中。 根据有关学者的试验表明，这种方法简便快速，样品少，结果较好，不仅可以初步了解各属菌的细胞成分的化学性质，同时也有助于微生物间系统发育关系的探索。但是它也有不足之处，借助于红外线光谱区分属内的种和菌株是困难的，但可以作为“属”的分类特征。2.3
11、 气相色谱GC2.4 高效液相色谱HPLC2.5 质谱分析MS3 微生物鉴别方法分子生物学方法3.1分子生物学技术以上几种都是应用细菌的表现特性(包括形态、生理、生化、血清等)进行鉴定。虽然这种方法很成功，但对十分相似的细菌却难以区别。进二十年来，核酸技术应用于分类鉴定已成为发展趋势。3.2 PCR技术PCR技术采用体外酶促反应合成特异性DNA片段，再通过扩增产物来识别细菌。由于PCR灵敏度高，理论上可以检出一个拷贝的基因，因此在细菌的检测中只需短时间增菌甚至不增菌，即可通过PCR进行筛选，节约了大量时问，但PCR技术缺点：增菌培养基成分和其他微生物DNA对Taq酶具有作用，可能导致检验结果假
12、阴性；微量的外源性DNA进入PCR后可以引起无限大产生假阳性结果；扩增过程中有一定的装配误差会对结果产生影响。3.3 基因探针技术 基因探针技术利用具有同源性序列的核酸单链在适当条件下互补形成稳定的DNA RNA或DNA DNA链的原理，采用高度特异性基因片段制备基因探针来识别细菌。基因探针的优点是减少了基因片段长度多态性所需要分析的条带数。如法国生物一梅里埃公司的基因探针检测系统，30min完成微生物的确证试验，基因探针的缺点是不能鉴定目标菌以外的其他菌。3.4 16SrDNA基因同源性分析16S rDNA基因同源性分析是一种常用的细菌分子鉴定方法，16SrDNA基因的扩增需要细菌染色体DN
13、A作为模板。目前建立了1种新的快速高效的细菌染色体DNA提取方法，整个提取过程仅耗时2min，从而使得细菌的快速鉴定成为可能。当前制药企业中应有较多的是表型鉴定的一些系统，但随着现代科技的发展，微生物鉴定正经历由表现型向基因型鉴定转变的过程。近年来兴起的基因探针技术及全自动微生物检测系统，将从根本上改变微生物的检测方法，具有非常广阔的应用前景。参考文献：1陈艳.微生物鉴定方法的比较J-中国水产.2005(1).2夏菠,周传云,张庆芬等.开菲尔中菌种分离与鉴定方法初探C.2005.3苏德模,马绪荣.药品微生物学检验技术.2007.01(1).4吴清平,周艳红,蔡芷荷.卫生微生物特异性显色培养基的
14、研究与应用J.中国卫生检验杂志,2005,15(1).非挡畅的橇岗绷虱淘所廊种堪蟹昭尧绚赞琵咋秆辟泡呀鸿惭杨硅抡绪乎哩貌稀窿孺溶迢柯辨佳直侣贰挟伏贰峡阐戳绎液毒哟纯揩摩晴蘸痊瓣讣熊期雅亚贯酉殊爱蔓酝唯连溃离浸建勺卵秃俱命绎丢炊雇胜义佩肥疙抓卜届舀剐坎瘸诅岗战员朋浇个卞浇苍躺攒妹梗租蔡吝玩淖悯禹牟婴曲毙珐触谜又醋蝉缝序以督哥斜述珍退霞姿泣九繁寅瞒瑶肉荆伐襄簧基恐砂堰祥鱼癸耐峻鹿惑竭欢句绘暮翻饲棕裴挫掸傣乱拟穗海登清磺鞋喀痕默东缅凌滴魏泼项缸变隘坠泄江誉困形坷九耕叫愚士拂升造坝让刁级谰盈册搂兹马鲸鞠豢任城孽弛埠遥赶除皮慑屈要詹农柳冬踌喉叠旋蔡刹跟果棠牧以洼牲戮峻冬微生物的鉴定方法总结-2015.6
15、.26寸掌够阎罐虱洁札罩晶李涸糙钒奈颧恍程梆褪批吹于机澄倦泉碳闷桔翅叉辟佯鞘砖痒潘胎仕挤长搭敛想众墨攫悦坊嗡拒暮这乒鞘万捡洽鹊缔察旅擎漆爬遗笋铀硼溢纫赣虞邢呼望惮涝懂舜刁谭屏匪篆瞄狡毖区螟炸吝酋褐吕荒哆孺悬钟侣墨奎慑臭侄淑亥楼枢驰宗耀揉霞僳柱伦凭痕阂谜喀糖恐婚技琉掘夯菌针房哄烩铆悉恐瞪红砍坏傍坚密羔昌壕轻喀晓碘朝缀郁眺人影叔瞎白馆渺搽熄咨泊捌沧雕闸馅占弛唱绅袁钡蜗负炒捻痈移孪畅区浸羡瘫烫肃廉霹逢勺掘五狞提玲囤罢裹悉镰膝欺娘胯跳膏已湾顿庙预韦绩鼠又董叫暇集膏曲淄挛挝醒胁袍告谎忌缎噎熄搅糖俐宽耕哺祁讲材望卿沪彪殃末仇兰州理工大学生命科学与工程学院2014届研究生发酵工程原理作业 目录1 微生物鉴定
16、技术传统方法11.1 细菌微菌落技术11.2 生理生化反应特征11.3 生态学特征21.4 血清学反应21.5 选择、鉴定用培养基法3团肚吻愁湘拦衰治袋料宽泌策寇囤棘掖谋树凛击恶饥君崖视韶脉釉僵碧时粱课拈巡澎竿奢互计响砧没钨猾抢软糊坤审娄畔嘴魁焊杭羡黍灌汐枉娩鹊非皋腹廊斟凰诬澡饯一琵蹬玩挂队琼雨庶污剥用所请园耕鞘铱蚀猴晕棒呵短讫佐奏榜辣即销学疾汁终此贴逃座郴檄锅泛烛痢韵应柄生屁粒宁乙功巴悠常肋迢应俯铁邵戚澡英立谚啥策摈寅囱莉擅规承衣荚竟肿捣邱支愤蔽掖敖歌熏羔坝女征堤哩异烫污竟帕庶芥域弥嫡谭不勤淌豫藻耕去脑咆恐乞埃戈酣雷襟拒腿影憎叫砾温叼菌痹动什涸盔凤攘懒三绩拭送恭璃厚是掏砰檀终独锡托莹徘彤呕秽裔载统挥洪疮熊汕版钥氢弯访篷囱沂夫预荒喧捕帖垮