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1、精选优质文档-倾情为你奉上贴壁细胞换液材料：吸管，废液缸（一同紫外，30min），PBS缓冲液（ PBS缓冲液是磷酸缓冲盐溶液，一般作为溶剂作为溶解保护试剂的作用，具有盐平衡、可调整的适宜PH缓冲作用），培养液（从冰箱取出，放在显微镜桌子上，不能紫外）1. 紫外2. 镜下观察细胞形态，是否贴壁生长3. 将培养液倒入废液缸4. 加2mlPBS（将培养瓶竖立，向没有细胞的一面吹，目的为了清洗），轻摇使瓶底铺满PBS，倒入废液缸，重复两次。5. 将培养瓶竖立，加4ml培养液（一定不要从细胞贴壁面加入培养液，应从侧壁加入，以免冲落细胞），后放平培养瓶，观察细胞情况后。6. 做好标记（换液时间、细胞种类
2、、操作人员等信息），再次用酒精喷培养瓶，后放置培养箱。贴壁细胞传代1. 【消毒台面】紫外：吸管、离心管、移液枪、枪头、培养皿（培养瓶）、废液缸 ；常温放置：PBS，DMEM培养基（含各种aa和G的培养基，分高糖型有利于细胞停泊一个位置，适用于生长较快，附着困难的肿瘤细胞和低糖型），胰酶 2. 取细胞观察（显微镜消毒）（一般选择生长80%的细胞）3. 倒掉培养液，用2mlPBS洗2遍（注意从侧壁加入，以免冲掉细胞）4. 加入1ml胰酶，置于37培养箱消化1.5min （“十字”晃动） 5. 拿出培养瓶，观察消化程度，用移液枪加培养基终止消化反应6. 移液枪反复吹打细胞，使其脱壁并分散7. 将细胞转移至离心管，配平后，小于等于1000rpm/min离心5min8. 弃上清，加入4ml培养基，吹打混匀（至少30次），制细胞悬液 9. 取1-2ml细胞于培养皿或培养瓶中，再加入2-3ml培养液，轻摇混匀10. 观察细胞密度（保证一定数量，太少影响生长情况），放入37 CO2培养箱中培养，次日观察细胞状态PS.试剂、器材从外界放入培养箱或操作台时要用酒精消毒。 每次开试剂瓶，培养瓶等盖子时，做到“三烧”，先用酒精灯烧接缝除，打开后再烧瓶口和瓶盖（关盖子时顺序相反）。 双手不能交叉操作，手不能经过打开的瓶口上方。 专心-专注-专业