国自然标书模板(共21页).docx

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1、精选优质文档-倾情为你奉上申请代码受理部门收件日期受理编号国家自然科学基金申 请 书（2 0 1 6 版）资助类别：青年科学基金项目亚类说明： 附注说明：项目名称：Poly(A)化GANT61纳米颗粒靶向治疗胶质瘤的实验研究申 请 人：电 话：依托单位：通讯地址：邮政编码：单位电话：电子邮箱：申报日期：国家自然科学基金委员会专心-专注-专业申请人信息姓名性别出生年月民族学位职称每年工作时间（月）电话电子邮箱传真国别或地区个 人 通 讯 地 址工作单位主 要 研 究 领 域依托单位信息名称联系人电子邮箱电话网站地址合作研究单位信息单 位 名 称项目基本信息项目名称Poly(A)化GANT61纳米

2、颗粒靶向治疗胶质瘤的实验研究英文名称study Of Poly functionalized GANT61 Nanoparticles targeting treatment of glioma资助类别亚类说明附注说明申请代码基地类别研究期限申请经费23.8000万元中 文 关 键 词GANT61 ；SHH信号通路；纳米颗粒；胶质瘤；靶向治疗英 文 关 键 词GANT61 ; Sonic Hedgehog Signaling Pathway ; Nanoparticles; glioma; targeted therapy基本信息中文摘要胶质瘤是最常见的中枢神经系统恶性肿瘤之一，许多患者治疗后

3、常常遗留神经系统功能缺陷和认知障碍，严重影响着患儿的生存质量。因此，寻找新型、高效、安全的治疗方法对于治疗胶质瘤具有重要意义。我们在前期的研究中发现，Gli1蛋白的表达与胶质瘤的发生相关。Gli1靶向抑制剂GANT61能够明显抑制胶质瘤的增殖生长，促进其凋亡。但同时GANT61还存在着一定的缺限。为此，本项目拟结合体内和体外实验，通过利用GA NT61与Poly腺嘌呤(A碱基)氢键特异性结合，同具有良好生物相容性的二氧化硅纳米颗粒相结合，研究一种Poly(A)化GANT61二氧化硅纳米颗粒。通过免疫组化、westerblot、qPCR、流式细胞术、cck8等实验，深入研究其在胶质瘤增殖及凋亡的

4、作用，为提高胶质瘤的治疗效果提供新的思路和理论依据。英文摘要Glioma (MB) is the most common malignant brain tumor, and clinical outcome is worse. Many patients suffer from considerablelong-termdisability and morbidity after aggressive multimodal therapy. Therefore, it is important to find a novel, efficient, safety therapeutic me

5、thod for glioma. our results indicate a significant role for Gli1 in the proliferation of MB, and molecular targeting of Gli1,GANT61, is a potential therapeutic approach to inhibitory tumor proliferation and induced cell apoptosis of MB. However, GANT61 has some disadvantages. Therefore, this projec

6、t intends to combine in vivo and in vitro experiments. Combined GANT61, Poly (A) with silica nanoparticles can synthesise GANT61 with Poly(A) silica nanoparticles. It assays by immunohistochemistry, western blot, qPCR, flow cytometry and CCK8 to investigate tumor proliferation and cell apoptosis of

7、MB. In order to improve the treatment effect of glioma provides new train of thought and theory basis.国家自然科学基金申请书项目组主要参与者（注: 项目组主要参与者不包括项目申请人）编号姓名出生年月性别职 称学 位单位名称电话电子邮箱证件号码每年工作时间（月）总人数高级中级初级博士后博士生硕士生第 3 页国家自然科学基金项目资金预算表金额单位：万元序号科目名称金额1一、 项目资金23.80002(一) 直接费用20.000031、 设备费2.00004(1)设备购置费1.005(2)设备试制费

8、1.006(3)设备改造与租赁费0.000072、 材料费8.0083、 测试化验加工费0.5094、 燃料动力费1.00105、 差旅费1.00116、 会议费1.00127、 国际合作与交流费0.50138、 出版/文献/信息传播/知识产权事务费2.00149、 劳务费3.001510、 专家咨询费1.001611、 其他支出0.000017(二) 间接费用3.800018其中：绩效支出0.950019二、 自筹资金0.0000预算说明书（定额补助）（请按国家自然科学基金项目资金预算表编制说明中的要求，对各项支出的主要用途和测算理由及合作研究外拨资金单价10万元的设备费等内容进行详细说明，

9、可根据需要另加附页。）科目 申请经费（万元） 备注（计算依据与说明） 一、 项目资金： 23.8 (一) 直接费用： 20 1、 设备费： 2 (1)设备购置费： 1 (2)设备试制费： 1 (3)设备改造与租赁费： 2、 材料费： 8 细胞系、细胞培养液、细胞凋亡检测试剂盒、各种一抗等，具体见经费申请说明 3、 测试化验加工费： 0.5 纳米颗粒合成、 RNA引物合成、 流式细胞仪检测等 4、 燃料动力费： 1 水、电和实验室平台的有偿使用费 5、 差旅费： 1 参加学术会议交流和实验经验交谈会议 6、 会议费： 1 参加国内和国际学术会议交流 7、 国际合作与交流费： 0.5 到国内外先进

10、实验室学习和交流的来回机票、住宿等 8、 出版/文献/信息传播/知2 文献检索、复印打印、版面费、信识产权事务费： 息咨询、通讯费等 9、 劳务费： 3 直接参加项目研究的研究生的劳务费用 10、 专家咨询费： 1 11、 其他支出： (二) 间接费用： 其中：绩效支出： 二、 自筹资金： 5.协作费 、（一）立项依据与研究内容（4000-8000 字）：1. 项目的立项依据（研究意义、国内外研究现状及发展动态分析， 需结合科学研究发展趋势来论述科学意义；或结合国民经济和社会发展中迫切需要解决的关键科技问题来论述其应用前景。附主要参考文献目录）；1.1 研究意义胶质瘤 (glioma) 是最常

11、见的中枢神经系统恶性肿瘤之一，约占儿童脑肿瘤的 25%。具有生长迅速、手术难以彻底切除的特点。近年来开展的以手术切除并结合放化疗的综合治疗仅能治愈部分 病例，还有相当多的胶质瘤患者治疗后遗留神经系统功能缺陷和认知障碍， 严重影响着患者的生存质量。因此，对胶质瘤的靶向治疗和分子机制的深入研究，将为治疗胶质瘤的治疗提供更多的理论依据和实验基础。寻找治疗 GB 更安全有效的方法，并尽可能减少后遗症是十分必要的，具有重大的社会意义。SHH 信号通路（Sonic Hedgehog Pathway, SHH）的传递过程可以简单总结四个部分：Sonic Hedgehog（SHH 配体蛋白）- Ptch（跨膜

12、蛋白受体）- Smo（跨膜蛋白）- Gli（转录因子）的传递过程。Gli 是该信号通路下游终末端的转录因子， 调控着下游 CyclinD1、N-myc、PTCH1、bcl-2 和 bax 等多个靶基因。GANT61 是该通路下游的 Gli 抑制剂，它主要与 Gli1DNA 结合，抑制 Gli1、Gli2 锌指蛋白活性，从而拮抗 SHH 信号通路 Smo 下游 Gli1 等转录因子的转录活性。虽然多项研究表明 GANT61 能够明显抑制肿瘤的生长增殖，促进肿瘤细胞的凋亡， 但 GANT61 同样也存在着一定的缺点，如何提高药物的靶向运输，提升治疗效果，降低药物的不良反应等一系列问题，都需要通过一

13、种新型的载体材料来解决。1.2 国内外研究现状及发展动态分析随着新世纪生物材料科学的发展，功能化的纳米材料在肿瘤的治疗方面存在着广阔的应用前景。通过构建纳米药物载体，能够实现药物精准的控制释放，提高药物的靶向运输效率和治疗效果，并且能够大大减少药物的不良反应。同时，聚腺嘌呤(PolyA) 广泛存在于生物体中，和生命的活动息息相关，尤其是在 RNA 的转录和翻译之中发挥着重要作用。而且，许多肿瘤细胞的 mRNA 末端往往存在着过度表达(PolyA)尾端。很多研究发现，利用 mRNA 末端的Poly(A) 作为药物靶点，其能够通过与药物的氢键特异结合，可以抑制 mRNA 的翻译， 从而抑制肿瘤的发

14、生发展。同时，由于氢键结合力介于共价结合和静电吸附之间， 在一定的条件下(如低 pH、升温)，其结合力将会下降。因此，利用 Poly(A)能够和药物之间相互作用的特点进行装载药物，可能会成为一种新型的抗肿瘤药物载体。因此，利用小分子 GANT61 化合物与腺嘌呤(A 碱基)氢键特异性结合，并在酸性环境下结合力将会下降的特点，同具有良好生物相容性、DNA 酶切保护性以及易于生物修饰的二氧化硅纳米颗粒相结合，研究一种基于(PolyA)和二氧化硅纳米颗粒 (Silica coated nanoparticles, SiNPs) 的，并且能够通过肿瘤的酸性环境进行可控性的释放抗肿瘤药物，将是一种更新型

15、、更有效、更安全和更有前景的治疗方式，对胶质瘤的治疗过程具有重要意义。2. 项目的研究内容、研究目标，以及拟解决的关键科学问题（ 此部分为重点阐述内容）；2.1 研究内容(1) 在体外分离培养 DOAY 细胞，研究 GANT61 对胶质瘤 DOAY 细胞增殖抑制的影响，通过流式细胞术检测 GANT61 对胶质瘤的促凋亡作用， Western blot 和qPCR 等实验研究胶质瘤中DOAY 细胞SHH 信号通路中Gli1、Gli2、CyclinD1、Caspase3、Caspase9、Bax、Bcl-2 等表达情况。(2) 成功构建 Poly(A)化 GANT61 纳米颗粒。分别通过高分辨电镜

16、、高效液相色谱法检测、CCK8 法和激光共聚焦研究等实验研究合成纳米颗粒的表面特征、纳米颗粒药物的包封率和载药量、细胞的抑制率和细胞的吞噬及释放。(3) 制作胶质瘤裸小鼠移植瘤模型， 使用构建成功的 Poly(A) 化GANT61 纳米颗粒颈内动脉注射移植裸小鼠胶质瘤进行动物实验， Westernblot、免疫组化及 qPCR 等实验研究胶质瘤中SHH 信号通路中Gli1、Gli2、CyclinD1、Caspase3、Caspase9、Bax、Bcl-2 等表达情况。2.2 研究目标(1) 在体外培养胶质瘤 Doay 细胞，研究 SHH 信号通路靶向抑制剂GANT61 对胶质瘤 Doay 细胞

17、增殖抑制的影响。(2) 合成 Poly(A)化 GANT61 纳米颗粒，分别通过高分辨电镜、高效液相色谱法检测、CCK8 法和激光共聚焦研究等实验研究合成纳米颗粒的表面特征、纳米颗粒药物的包封率和载药量、细胞的抑制率和细胞的吞噬及释放。(3) Poly(A)化 GANT61 纳米颗粒靶向治疗裸鼠胶质瘤，再使用免疫组化、westen blot 和 qPCR 检测胶质瘤中 SHH 信号通路中相关蛋白和基因的表达情况。2.3 拟解决的关键科学问题1、在体外构建建立 Poly(A)化 GANT61 纳米颗粒合成，目前我们已经进行了相关的研究。2、使用透射电子显微镜、电泳、高效液相色谱仪等方法检测纳米颗

18、粒的形貌、电位、稳定性、载药量、包封率以及考察 GANT61 在不同 pH 值溶液的释放行为。再通过激光共聚焦扫描仪考察细胞对颗粒的吞噬以及吞噬后颗粒的定位。3、建立裸鼠的胶质瘤模型具有一定的技术困难，本课题组已经在前期准备工作中进行了初步的研究。3. 拟采取的研究方案及可行性分析（包括研究方法、技术路线、实验手段、关键技术等说明）；3.1 研究方案（1） 细胞培养细胞培养在体外分离培养 DOAY 细胞，胶质瘤 Doay 细胞株在含 10% 胎牛血清的 DMEM 培养基于 37、5%CO2 恒温孵箱进行贴壁培养，每 23 天根据细胞生长的密度和培养液酸碱度的变化更换培养液，当细胞汇合度达 80

19、 90%时进行传代培养，传代培养时根据细胞生长情况进行 1:2 或 1:4 的传代。实验前用台盼蓝染色法鉴定细胞活力在 98%以上。（2） SHH 信号通路抑制剂 GANT61 对胶质瘤 DOAY 细胞的靶向抑制作用。研究 SHH 信号通路抑制剂 GANT61 对胶质瘤 DOAY 细胞增殖抑制的影响，通过流式细胞术检测 GANT61 对胶质瘤的促凋亡作用，并使用 qPCR、westerblot 及免疫荧光进行分别检测SHH 信号通路中相关蛋白的表达情况：Gli1、 Gli2、CyclinD1、Bcl-2、Bax 及 Caspase3 等。（3） 构建 Poly(A)化 GANT61 纳米颗粒采

20、用反向微乳法合成羧基化二氧化硅纳米颗粒(COOHSiNPs)。将环己烷 7 ml、正己醇 1.8 ml 以及表面活性剂 Triton X-100 2ml 混合均匀后，加入 500 l 超纯水于常温下搅拌 30 min，再将 100 l 氨水和 100 l TEOS 加入到微乳液体系中，连续搅拌 24 h。然后加入 60l 羧基硅烷化试剂 (CPTES)，于室温下继续搅拌反应 24 h 后，破乳、离心分离颗粒，获得 COOHSiNPs 颗粒。采用 EDCNHS 交联方法将Poly(A)修饰到COOH-SiNPs 表面。取2mg COOHSiNPs 分散于1 mL MES 缓冲液中，加入 3.5m

21、g NHS 和 1.2mg EDC，在上述混合液中再加入 1.2 nmol Poly(A)，于室温下振荡 8h 后离心收集颗粒，用超纯水洗涤 3 次，即得到Poly(A)-SiNPs，采用琼脂糖凝胶电泳法考察 Poly(A)是否成功修饰在二氧化硅纳米颗粒表面。取 2 mg Poly(A)SiNPs 颗粒分散在 1ml 50 M/L GANT61 溶液中， 于室温中振荡 1 h 后离心收集颗粒，用超纯水洗涤 3 次，即得到 Poly(A)化GANT61 纳米颗粒。（4） CCK8 法 Poly(A)化 GANT61 纳米颗粒的生物相容性以及对癌细胞杀伤效果。Doay 细胞培养生长状态良好时，消化

22、细胞制成单细胞悬液。细胞计数后以2104 细胞接种于 96 孔板，37、5%CO2 培养过夜。第二天，更换新鲜的 DMEM培养基，并分别设置不同浓度的 Poly(A)化 GANT61 纳米颗粒组、Poly(A)-SiNPs 组、GANT61 组及空白对照组，分别设置加了相应量细胞培养液、药物和 CCK-8 溶液但没有加入细胞的孔作为空白对照。在细胞培养箱内继续孵育，每孔于加药后 24h、48h 加入 CCK-8 溶液 10l，并终止反应，用酶标仪测定 450nm 处吸光度值，用所测得的 A450 计算细胞增殖抑制率。细胞增殖抑制率=(对照组 A450 值-实验组 A450 值)/对照组 A45

23、0 值100%。上述实验分别在 1 天、1 周、2 周和 3 周检查。（5） 激光共聚焦研究 Poly(A)化 GANT61 纳米颗粒的细胞吞噬与释放研究为了考察 Poly(A)化 GANT61 纳米颗粒被细胞吞噬后的定位情况以及在细胞内部的释放行为。将 DOAY 细胞接种于激光共聚焦皿内，然后将培养皿放入 37， 5C02 的培养箱中培养 12 h 后，加入荧光化 Poly(A)化 GANT61 纳米颗粒纳米颗粒继续孵育 5 h 后去除上清，用 D-hanks 清洗，然后利用 LysoTracker Green 溶 液对细胞中的溶酶体进行标记，采用激光共聚焦显微镜对细胞进行成像观察载体 在细

24、胞中定位情况。随后将皿放入培养箱继续培养 24 h 后，再进行激光共聚焦成像来考察颗粒在细胞内的释放行为。（6） 高分辨光镜及扫描电镜观察 Poly(A)化 GANT61 纳米颗粒首先用显微镜观察 Poly(A)化 GANT61 纳米颗粒表面形态特征，继而用TOSHIBA800S 扫描电镜,电压 20kV，每一规格测量 300 个微球直径，计算微球平均直径。（7） 高效液相色谱法检测药物包封率和载药量的测定分别精密称取 Poly(A)化 GANT61 纳米颗粒 5mg 置 10ml 量瓶中，加二氯甲烷适量溶解，用甲醇稀释至刻度，过滤，取过滤液 100L 稀释到 2.5mL，取 20l 溶液注入

25、高效液相色谱仪，记录峰面积，计算载药量和包封率。微球的载药量= (微球中药物含量/微球重量)*100，包封率=（微球中药物含量/投药量)*100。检测微球中剩余的 GANT61 量，从而计算出不同时段释放药物量，绘制释放曲线。7、建立胶质瘤裸鼠移植瘤模型裸鼠麻醉后立体定向下(矢状缝旁开 2.5mm，冠状缝前 1mm，深 5mm)缓慢匀速(10 分钟)将 10l 胶质瘤 Doay 细胞（1106）注射到裸鼠右侧额叶。移植后 1 周、2 周、4 周处死动物，测定各组肿瘤体积并进行 HE 染色观察形态学、坏死及 MVP 情况，测定肿瘤体积。使用构建成功的 Poly(A)化 GANT61 纳米颗粒在裸

26、鼠胶质瘤模型制作成功后 3 天进行颈内动脉移注射。8、免疫组化处死裸鼠后，同时肿瘤组织石蜡切片行免疫组化实验。根据 Poly(A) 化GANT61 纳米颗粒组、Poly(A)化纳米颗粒组、Gant61 组及空白对照组进行分组。分别检测 SHH 信号通路中相关蛋白的表达情况：Gli1、Gli2、CyclinD1、Bcl-2、Bax 及 Caspase3 等。将石蜡切片进行脱水固定后，分别加入上述各种抗体在 37 孵育 30min。再经二抗(1：100)在 37下孵育 30min 后，在显微镜下观察并拍照记录。8、Western blot处死裸鼠后，同时提取肿瘤组织行 Western blot 实

27、验。根据 Poly(A)化GANT61 纳米颗粒组、Poly(A)化纳米颗粒组、Gant61 组及空白对照组进行分组。分别检测 SHH 信号通路中相关蛋白的表达情况：Gli1、Gli2、CyclinD1、Bcl-2、Bax 及 Caspase3 等。提取细胞总蛋白，BCA 法测定蛋白浓度。取 50g 蛋白质， 与 2SD S 上样缓冲液 1:1 混合，100变性 10min。置冰上 2min，进行 12% SDS-PAGE 胶电泳。电泳完毕后，切胶、转膜。PVDF 膜用 20ml 封闭液(含 5 脱脂奶粉的 PBS-T)室温孵育 1h，弃封闭液，加入兔抗人多克隆抗体(1:1000)，4 孵育过

28、夜后洗膜，加入 HRP 标记的抗兔二抗(1:4000)孵育后洗膜。加入 ECL 化学发光显色试剂，反应 5min，X 线胶片曝光后，显影、定影，以 -actin 作为内对照。9、qPCR 实验检测 SHH 信号通路表达情况。处死裸鼠后，同时提取肿瘤组织 mRNA 行 qPCR 实验。根据 Poly(A)化GANT61 纳米颗粒组、Poly(A)化纳米颗粒组、Gant61 组及空白对照组进行分组。分别检测 SHH 信号通路中相关蛋白的表达情况：Gli1、Gli2、GyclinD1、Bcl-2、Bax 及 Gaspase3 等。Daoy 细胞进行上述分组干预后，收集肿瘤组织，Trizol 法提取各

29、组肿瘤组织的总 RNA，进行逆转录成 cDNA；取各分组 cDNA 2l，配制成 Real-Time PCR 反应体系进行扩增。采用 Real-timePCR 相对定量的方法，比较各组目的基因与管家基因 -actin 的 CT 值，采用 2-CT 方法，得出各组目的基因的相对表达量。结果使用 Bio-Rad CFX Manager 自动计算，采用 SPSS 统计软件进行统计分析。3.2 技术路线 1GANT61(PolyA)尾端二氧化硅纳米颗粒琼脂糖凝胶 激光共聚焦研究 高效液相色谱法 高分辨光镜及扫描电镜 CCK8 法技术路线 2免疫组化Westernblot试验 qPCR 流式细胞术4.

30、本项目的特色与创新之处；1、研究 SHH 信号传导通路在胶质瘤发生发展过程中的机制，研究 GLI1 和CyclinD1 在胶质瘤中的异常表达及意义2、研究 Poly(A)化 GANT61 纳米颗粒抑制胶质瘤的增殖生长，分析其抑制肿瘤生长的机制及原因，为进一步高效治疗胶质瘤提供理论依据。3、通过裸鼠胶质瘤模型检验 Poly(A)化 GANT61 纳米颗粒对肿瘤的抑制及促凋亡作用，为临床治疗胶质瘤提供新型的、更安全及更高效的治疗方案。5. 年度研究计划及预期研究结果（包括拟组织的重要学术交流活动、国际合作与交流计划等）。5.1 年度研究计划2016.03.01-2017.03.01：培养 Doay

31、 细胞，完成 SHH 信号通路靶向抑制剂GANT61 对胶质瘤 DOAY 细胞增殖抑制的影响。（在前期工作中已初步完成）2017.03.01-2018.03.01：构建 Poly(A)化 GANT61 纳米颗粒，研究纳米颗粒稳定性、载药量、包封率以及释放等情况。进一步研究 Poly(A)化 GANT61 纳米颗粒对胶质瘤 DOAY 细胞的增殖抑制作用，并撰写论文 1-2 篇。2018.03.01-2019.03.01：制作裸鼠胶质瘤动物模型，进行裸鼠胶质瘤模型颈内动脉注 Poly(A)化 GANT61 纳米颗粒，研究 Poly(A)化 GANT61 纳米颗粒对胶质瘤的增殖抑制作用。撰写论文 2

32、-3 篇，申请专利，并进行资料总结、结题和成果鉴定等。5.2 预期研究结果:通过本项目的实施，我们预计 SHH 信号通路靶向抑制剂能够抑制 MB 的发生发展，影响相关基因、蛋白的表达，从而影响肿瘤增殖生长。利用该结果，使我们能够进一步阐明 MB 中 SHH 信号通路的发生机理，并使用纳米材料，高效、准确的靶向肿瘤治疗，对于临床上早期治疗 MB，减少后遗症具有重要的理论意义和实际应用价值。国内权威学术刊物发表论文 1 篇，SCI 收录 1 篇。培养硕士研究生 2 名，博士 1 名。（二）研究基础与工作条件1. 研究基础（与本项目相关的研究工作积累和已取得的研究工作成绩）；2. 工作条件（包括已具

33、备的实验条件，尚缺少的实验条件和拟解决的途径，包括利用国家实验室、国家重点实验室和部门重点实验室等研究基地的计划与落实情况）；分子生物学仪器：PCR 扩增仪、电泳仪、DNA 合成仪、离心机、基因芯片蛋白芯片检测仪KOFP 鼠立体定向头加图像操作分析仪和图像分析系统、荧光显微镜、激光共聚焦显微镜、电子显微镜及高效液相色谱仪；完善的动物实验室，具备提供合格的实验动物的条件和能力。3. 正在承担的与本项目相关的科研项目情况（申请人和项目组 主要参与者正在承担的与本项目相关的科研项目情况，包括国家自然 科学基金的项目和国家其他科技计划项目，要注明项目的名称和编号、经费来源、起止年月、与本项目的关系及负

34、责的内容等）；4. 完成国家自然科学基金项目情况（对申请人负责的前一个已结题科学基金项目（项目名称及批准号）完成情况、后续研究进展及与本申请项目的关系加以详细说明。另附该已结题项目研究工作总结摘要（限 500 字）和相关成果的详细目录）。（三）其他需要说明的问题1. 申请人同年申请不同类型的国家自然科学基金项目情况（列明同年申请的其他项目的项目类型、项目名称信息，并说明与本项目之间的区别与联系）。2. 具有高级专业技术职务（职称）的申请人或者主要参与者是否存在同年申请或者参与申请国家自然科学基金项目的单位不一致的情况；如存在上述情况，列明所涉及人员的姓名，申请或参与申请的其他项目的项目类型、项

35、目名称、单位名称、上述人员在该项目中是申请人还是参与者，并说明单位不一致原因。 3. 具有高级专业技术职务（职称）的申请人或者主要参与者是否存在与正在承担的国家自然科学基金项目的单位不一致的情况；如存在上述情况，列明所涉及人员的姓名，正在承担项目的批准号、项目类型、项目名称、单位名称、起止年月，并说明单位不一致原因。 4. 其他。项目创新之处1、研究 SHH 信号传导通路在胶质瘤发生发展过程中的机制，研究 GLI1 和CyclinD1 在胶质瘤中的异常表达及意义2、研究Poly(A)化 GANT61 纳米颗粒抑制胶质瘤的增殖生长，分析其抑制肿瘤生长的机制及原因，为进一步高效治疗胶质瘤提供理论依据。3、通过裸鼠胶质瘤模型检验 Poly(A)化 GANT61 纳米颗粒对肿瘤的抑制及促凋亡作用，为临床治疗胶质瘤提供新型的、更安全及更高效的治疗方案。