间充质干细胞贴壁培养实验报告(共2页).doc

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1、精选优质文档-倾情为你奉上间充质干细胞贴壁培养实验报告姓名:常琳 学号: 日期:2015/10/21一、 实验原理间充质干细胞最早在骨髓中发现,随后还发现存在于人体发生、发育过程的许多种组织中。目前, 我们能够从骨髓、脂肪、滑膜、骨骼、肌肉、肺、肝、胰腺等组织以及羊水、脐带血中分离和制备间充质干细胞,用得最多的是骨髓来源的间充质干细胞。骨髓中除有造血干细胞外,还存在着另一种间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)MSC形成于发育中的骨髓腔,个体出生之后,附于骨髓窦的内腔面,形成一种包埋于窦状网络中的三维细胞结构,这种细胞除具有分化功能之外,可像未分化细胞那样易体外扩增

2、。MSC又是一种免疫缺陷的细胞,可抑制T淋巴细胞反应,有异体移植的可能。正是骨髓间充质干细胞有以上所述的不同于骨髓造血干细胞的特点,使得其分离取材方便、扩增迅速、可异体移植等,为组织细胞修复提供细胞来源。间充质干细胞临床应用于解决多种血液系统疾病,心血管疾病,肝硬化,神经系统疾病,膝关节半月板部分切除损伤修复,自身免疫性疾病等方面取得了重大突破,挽救了更多病患的生命。此外,间充质干细胞在神经系统修复及更多方面具有长远的发展前景。二、 实验材料实验动物:SD大鼠,四周龄,雄性,体重80100克实验手术器械:解剖剪、解剖镊、止血钳、胶头滴管等实验材料:清洗液(PBS和不含Ca+和Mg2+的HBSS

3、)培养液DEME添加10%FBS 105IU/l青霉素和100mg/l链霉素;以及含有8%的(500IU/L)肝素钠的PBS实验仪器:超净工作台、离心机三、 实验操作步骤1. 将SD大鼠处死后,浸泡于酒精中待用。2. 将后肢用碘酒和75%的酒精消毒后,减去后肢皮毛,用解剖剪剪下两侧的股骨和胫骨3. 将两侧的股骨和胫骨浸泡于HBSS中,并在超净工作台上清除干净其上的肌肉和韧带。并于HBSS清洗三次。4. 切除骨两端的干骺端,暴露骨髓腔,将含有8%的(500IU/L)肝素钠的PBS用10ml注射器注射于骨髓腔内,冲洗骨髓腔。5. 收集上述冲洗液,配平后离心(1000rpm ,8min)6. 用添加了15%的FBS、584g/ml的L-谷氨酰胺、105IU/L青霉素和100mg/l链霉素的DEME培养液重悬细胞,以5105个/ml的密度均匀接种到25ml的玻璃培养瓶中。7. 将上述培养瓶做好标记后,放于37和5%的CO2的培养箱中培养四、 实验注意事项1. 两侧的股骨和胫骨尽量清除干净其上的肌肉和韧带,避免混入成纤维细胞。2. 肌肉和韧带的分离要在HBSS液面下进行,防止污染。3. 吹打细胞时力度适中,避免细胞的破坏。与巨噬细胞相比,其粘附性差,吹打次数较少。4. 接种时先在培养瓶的底部接种,尽量使细胞均匀分布。专心-专注-专业

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