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1、精选优质文档-倾情为你奉上QPS-201加样流程和Step One Plus仪器的仪器操作要准备的东西：1. 八排管和盖子2. 96孔细胞培养板3. 移液器：10ul,20ul,100ul,200ul。4. 枪头10ul,20ul,100ul,200ul或者300ul。5. 200ul和600ul的PCR管。6. 试剂：QPk-201，上下游引物，cDNA，去RNA酶的PCR水7. 注意事项：A.引物的储存浓度100nm，工作浓度：5-10nmol,引物要过量，上下游引物要先混匀在一起，然后再加。内参actin和目标基因的引物都要混匀。混匀后的引物可用半个月，用时要反复混匀，水样的东西混20下
2、，油状的（酶）东西至少要混30下。B.试剂配总管用，cDNA和酶mix配一管，引物和水配一管。混匀之后，再分别加到管子里。为什么试剂要配总管呢？cDNA模板量很少，所以加多加少对实验影响很大，酶加10ul，样多，少量的东西要想混匀，必须放在大量的东西里这样再去混匀，就可以使每个管子里的样品都能保证是一致的。C.内参和目标基因都要跑3个复孔，取平均值，差异CT值要在0.5之内，如果Ct值0.5，结果就不可信，要重新再做。（一） QPk-201加样流程：用QPk-201做样品体系是20ul的。cDNA :2ulPCR水：6ul上下游引物共：2ul酶MIX：10ul一共是20ul体系。把cDNA :
3、2ul和酶mix：10ul共12ul配一管。把引物：2ul和水6ul共8ul配一管。以下以样品为例，加样流程如下：目标基因STOB1，样品六个，编号：1,2,3,C5，C6，C7内参基因actin样品123C5C6C7目标基因STOB1STOB1STOB1内参ActionActionAction如何计算是关键：6个样品，每个样品配一管，再分6次加，但是要考虑都损失，所以要多加10%的量，以避免最后没得加了。cDNA和酶配一管：cDNA:261.1=13.2ul酶Mix:1061.1=66ul，在总管里吹打30次混匀，取12ul。引物和水配一管：引物：2181.1=39.6ulPCR水：6181.1=118.8ul，在总管里吹打20次混匀，取8ul。配完之后要混匀。剩下的就是加样，贴在一侧的壁上，加样时，先吹打，再吸，贴壁打到底，按着不松，把移液器收回来。加一个样品，就换一个枪头。加另一管的时候，把管子反过来，再在这一侧壁上加管，的就不用换枪头了。这个加样的步骤一般是在碎冰上操作的，试剂一定要放在冰上的。加完之后，轻轻的盖上盖子，放在离心机里离心，让试剂都落到管子底部去。离心完之后，就可以放到定量PCR仪的黑色的96孔板子上了，然后打开机器，放进去，开始设置了。专心-专注-专业