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1、精选优质文档-倾情为你奉上生物制品复习题第一章 绪论1 生物制品的定义：是指以天然生物材料为原料，经物理、化学、生物化学和生物学工艺制备或以现代生物技术获得的，并以分析技术控制中间产物和成品质量的生物活性制剂。用于预防、诊断和治疗人类疾病的一类生物制品，称之为医用（或人用）生物制品。医用生物制品简称为生物制品。 2生物制品学的理论基础及技术基础？以微生物学、免疫学、生物化学、分子生物学等学科为理论基础；以现代生物技术包括基因工程、发酵工程、蛋白质工程等为技术基础的一门新的独立学科生物制品学。3生物制品的种类？ 主动免疫细菌类疫苗，病毒类疫苗，联合疫苗，类毒素 被动免疫用马血清制成：抗毒素及免疫
2、血清，有过敏源。血液制品4生物制品的种类？ （1）疫苗（主动免疫） 细菌类疫苗：由细菌、螺旋体或其衍生物制成的减毒活疫苗、灭活疫苗、重组DNA疫苗、亚单位疫苗等，如卡介苗、伤寒Vi多糖疫苗等。 病毒类疫苗：由病毒、衣原体、立克次体或其衍生物制成的减毒活疫苗、灭活疫苗、重组DNA疫苗、亚单位疫苗等，如麻疹、基因工程乙型肝炎疫苗等。 联合疫苗：由二种或二种以上疫苗抗原的原液配置而成的具有多种免疫原性的灭活疫苗或活疫苗，如百日咳、白喉、破伤风联合疫苗（DPT），麻疹、流行性腮腺炎、风疹联合疫苗（MMR）等。 类毒素：由细菌产生的外毒素，经解毒精致而成。如破伤风类毒素等。 疫苗类制品由于富含免疫原性强
3、的抗原，用于疾病预防的，又称预防制品或防疫制品。（2）抗毒素及免疫血清（被动免疫）：由特定抗原免疫动物所得血浆制成的抗毒素或免疫血清，如白喉抗毒素、抗狂犬病血清、抗蝮蛇毒血清等。（3）血液制品（被动免疫）：由健康人血液或特异免疫人血浆分离、提纯或基因工程技术制成的人血浆蛋白组份或血细胞组份制品，如人血白蛋白、人免疫球蛋白、人特异免疫球蛋白、人凝血因子、红细胞浓缩物等。（4）细胞因子制品：由健康人细胞增殖分离提纯或由基因工程技术制成的具有多种生物活性的多肽类或蛋白类制剂，如干扰素（IFN）、白细胞介素（IL）、集落刺激因子（CSF）、红细胞生成素（EPO）等。（5）诊断制品 体外诊断制品：由特定
4、抗原抗体或有关生物物质制成的免疫诊断试剂或诊断试剂盒，如伤寒、副伤寒、变形杆菌（OX19、OX2、OXK）诊断菌液、沙门菌属诊断血清、乙型肝炎表面（HbsAg）酶联免疫诊断试剂盒等，用于疾病的体外免疫诊断。 体内诊断制品：由变应原或有关抗原材料制成的免疫诊断试剂，如卡介苗纯蛋白衍生物（BCG-PPD）、布氏菌纯蛋白衍生物（RB-PPD）、锡克试验毒素、单克隆抗体等，用于疾病的体内免疫诊断。5生物制品的三大作用？ 预防，治疗，诊断6免疫调节剂的作用、分类及代表制剂？作用：提高人体的非特异免疫功能，以达到防病治病的效果。（1）细菌类免疫调节剂：如卡介苗及其衍生物、短棒状杆菌、链球菌制剂等，可促进机
5、体的非特异性免疫增强。（2）细胞因子：如白细胞介素、肿瘤坏死因子、干扰素、集落刺激因子等，能增强机体免疫功能，可起到抗炎、抗感染、抗肿瘤的作用。7诊断试剂分为哪几类？ 细菌学诊断试剂，病毒学诊断试剂，免疫学诊断试剂，临床化学试剂，肿瘤诊断试剂，其他常用试剂。诊断试剂在防病治病中起着重要的“侦定作用”。8临床化学试剂根据用途分为哪三类及它们的含义？ 用途：标准品，质量控制物及检测试剂盒 标准品：是指定量测定时的定标物或差比物。在相同条件下测定的待检样品中某物质的定量。 质量控制物：也叫质控物，用来控制测定的质量，是对整个测定的评价，以判定测定结果的可靠程度。 检测试剂盒：由完成某物质测定所需要的
6、各种试剂配套组装而成，并经过检定证明性能可靠，测定结果准确灵敏度达到一定要求，且重复性好的商品试剂。9肿瘤标志物含义：在癌变过程中由癌基因表达而生成的抗原和生物活性物质。它是肿瘤免疫化学诊断的主要物质基础。10生物制品发展历史上重要首创、年代及发明者？ 创始人：18世纪的英国Edward Jenner 于1798年发表论文，开创了弱毒活病毒疫苗，即牛痘苗，这就是生物制品的诞生。19世纪末，Pasteur 把弱毒微生物命名为“疫苗”。11我国生物制品制造业创始年份及机构： 创始于1919年，北平的天坛成立了我国第一所生物制品生产、研究机构中央防疫处（即北京生物制品研究所前身）12EPI的含义和W
7、HO倡导的EPI疫苗和防止的疾病以及我国又增加的疫苗？ EPI是指扩大的免疫计划，针对全世界健康儿童。WHO推荐的儿童计划免疫（百日咳、白喉、破伤风联合疫苗、麻疹疫苗、卡介苗、脊髓灰质炎疫苗）我国增加了乙肝疫苗和流行性乙脑活疫苗。13第一代、第二代、第三代疫苗的含义以及第一个基因工程疫苗？第一代是指传统疫苗，第二代疫苗的基因工程疫苗（基因重组疫苗）开发活疫苗，第三代疫苗的核酸疫苗（基因疫苗）DNA14学习生物制品基础及技术的意义？ 生物制品是人类与疾病作斗争的必不可少的强大武器；是多学科、多科技的结晶；是生命制品；又是反生物恐怖的重要手段。第二章 生物制品的GMP管理1 GMP的中文意思是药品
8、生产质量管理规范。2 药品生产管理部门和质量管理部门负责人不得相互兼任。3 主要工作室的照明宜为300勒克斯。4 验证是证明任何程序、生产过程、设备、物料、活动或系统确实能达到预期结果的有文件证明的一系列活动。5 在洁净区域中，细菌污染的最大来源是操作人员。6 质量管理部门是唯一能批准原材料合格与否，可否使用的部门。7 制药企业的药品生产人员，尤其是与药品直接接触的人员，其健康状况如何，将可能直接或间接地威胁药品质量。为此，有必要采取一定的措施以保证他们的身体状况维持在一定的水平，这主要是从以下方面予以控制：入厂前的体格检查，定期的健康检查，生病或皮肤表面有害伤口时的报告与处理。8 洁净室（区
9、）的温度和相对湿度应与药品生产工艺要求相适应，无特殊要求外，温湿度的控制范围为18-26，45-65%9 成品的制检与销售记录要保存至该批成品有效期后一年。10取样中最主要的影响因素是样品代表性和所取样品数。11药品质量是生产出来的。12洁净室（区）应定期轮换使用两种以上（包括两种）消毒剂进行消毒。13药品生产车间其洁净级别可划分为100级、1万级、10万级、30万级。14注射用水的储存可采用4以下存放，80以上保温，65以上保温循环。151988年3月根据国家主席令正式颁布了我国的药品生产质量管理规范16GMP根据其适用范围可分为三类：国际性的GMP，国家性质的GMP，行业性的GMP17GM
10、P的基本内容是什么？三个方面：（1）人员 （2）硬件 （3）软件 包含了14个部分，共88条。第三章 有关生物制品检定与标准化1生物制品检定的目的意义？ 制品的质量是生产出来的，检定只是客观地反映产品的质量水平。通过检定可以发现制品中存在的质量问题，提出改进意见。从而促进质量的提高。检定是制品质量控制基本内容之一，是质量保证的关键环节。2生物制品检定的前提和依据？ 生物制品是药品生产质量管理规范（GMP），在GMP的要求下生产的制品，才能保证质量，这是前提。 依据是生物制品规程，它是国家技术法规，对项目、方法、质量指标有明确规定。3生物制品检定的对象？ 生物制品检定的对象有原料的检定，包括菌毒
11、种、血源、生物材料、化学材料、水；辅料的检定，包装材料的检定，内外包装材料、标签、防伪标志和使用说明等；中间产品的检定，即原液、中间品等；半成品的检定和成品的检定。从性质来分为三方面：理化、安全性、效力。4半微量凯氏定氮法的原理？ 原理：量取一定体积样品（含氮量12mg左右）于凯氏定氮瓶中，加浓硫酸进行消化至澄明蓝绿色，使样品中的含氮物质经消化后变为硫酸铵，用氢氧化钠释放氨，用硼酸吸收，以标准酸进行滴定，由滴定的毫升数求出总氮量。5酚试剂法的原理？ 原理是在碱性溶液中，蛋白质与铜离子形成复合体，再与酚试剂反应呈深兰色，显色强度与蛋白质含量成正比。6聚丙烯酰胺凝胶电泳的双重作用？ 聚丙烯酰胺凝胶
12、电泳是目前分辨力最好的一种电泳方法，不仅具有电泳作用，而且有分子筛效果。7免疫电泳的特点？ 免疫电泳是琼脂电泳与免疫扩散相联合的技术，应用于可溶性抗原和抗体系统的检定。8电泳的特点？ 根据蛋白质的等电点不同，在不同环境中所带电荷的差异，以及分子大小的不同。使它们在电场中泳动速度不同而被分离开来，这就是电泳。9鲎试验的原理？ 革兰阴性菌细胞壁成分-内毒素，可激活鲎变形细胞溶解物中的凝固酶原成为凝固蛋白，再经交连酶的作用，进而聚合为纤维状凝胶，由此创立了细菌内毒素检测的凝胶鲎试验技术。本法灵敏度高，特异性好，简便。10外源性污染检查主要包括哪些方面检查？ 包括野毒检查、支原体检查、乙肝表面抗原(H
13、bsAg)、丙肝抗体（HCAb）和艾滋抗体（HIAb）的检查、残余细胞DNA检查4个方面。11血液制品中检查有关病毒所用试剂的要求：必须是国家批批检合格的试剂。12理想的效力试验应具备的条件？ 理想的效力试验应具备的条件是（1）试验方法具最佳代表性（2）试验方法应简便易行，重复性好（3）结果应明确（4）试验结果要能与流行病学调查基本取得一致（5）所用试验动物应标准化13什么叫ED50和CCID50？ ED50：动物半数能抗病症的剂量，称为半数有效量，用ED50表示。 CCID50：能使半数组织培养细胞感染的病毒剂量，称为半数组织细胞培养感染量，用CCID50表示。14活病毒感染细胞，引起细胞病
14、变在显微镜下检查的主要有哪三种现象？ 活病毒感染细胞后，可引起细胞圆缩、细胞破碎、细胞融合等现象。15什么叫Lf，并简单描述？ Lf是指絮状单位，能和一个单位抗毒素最先发生絮状沉淀反应的类毒素（或毒素）量称为一个絮状单位。16生物制品规程的性质：是国家标准和技术法规。17什么叫标准品及使用标准品的作用？ 用一已知效价的制品作为对照来校正试验结果，这种对照品就是标准品或参考品。18制备标准品的最基本要求：准确和稳定19生物制品检定规范化管理的基本要求？（1）检定实验室设计布局（2）检定实验室、设备、仪器、仪表、小容器玻璃器皿、量具（3）试剂、溶液、标准品、检定菌毒种的管理（4）检定操作（5）检定
15、人员（6）取样（7）实验动物管理20生物制品的质量检定主要分哪几大类？ 检定操作细则的编制，检定记录和检定报告单第四章 生物制品的培养基1培养基的定义：人工配制的含有适合微生物生产繁殖所需营养成分的混合物。2培养基是能满足微生物生长需要的一种营养物质，其成分包括氮源、碳源、无机盐、维生素及其它促细胞生长因子、水、凝固物质、指示剂、缓冲剂、抑制剂等九种物质。3有机氮源：包括各种蛋白胨、氨基酸、酵母浸膏和动植物组织的浸出液。4化学消毒剂按杀灭微生物能力的大小，可分为高效，中效和低效三类。高效消毒剂能杀灭包括细菌芽孢和真菌孢子在内的所有微生物，如过氧乙酸、戊二醛、环氧乙烷等；中效消毒剂能杀灭除细菌芽
16、孢之外的各种微生物，如甲醛、碘伏、石炭酸等；低效消毒剂只能杀灭细胞繁殖体，如氯已定、苯扎溴铵等。5水处理工作中，膜分离法包括微孔过滤、超过滤、电渗析、反渗透。6什么是离子交换树脂的化学特性？ 两个规律：一是化合价越大，吸附能力越大；二是同价金属离子，原子量越大，被吸附能力越强。其选择性顺序为：Fe3+Al3+Ca2+Mg2+K+Na+H+ 7离子交换树脂结构分为几部分？ 通常分为两个部分：一部分称为母体骨架，不参与交换反应，另一部分是连接在骨架上的活性基团，活性基团上的可交换离子能与水中同种离子进行交换。8注射用水：以纯化为水源，经蒸馏而制备，供输液和注射用的水。9什么是灭菌？：是用化学药品或
17、物理方法清除或杀灭所有活的微生物（致病微生物、非致病微生物以及它们的芽孢在内）的方法。10灭菌时间的含义及分几部分？ 灭菌时间是指当灭菌柜室达到规定温度后为达到灭菌要求所需的持续时间。有三部分组成：（1）热穿透时间 （2）热死亡时间 （3）安全时间11灭菌效果监测是指什么？ 灭菌效果监测是指生物指示剂监测，利用对热耐受力最强的嗜热脂肪芽孢杆菌的死亡情况来判断效果。它随同物品一起灭菌后应置于55-60温箱中孵育7天后判别结果。12简述压力蒸汽灭菌器的灭菌原理？（1）细菌蛋白质在含水多的环境中遇热易凝固（2）蒸汽传导快，渗透力强 （3）蒸汽中大量潜伏热，可迅速提高温度13生物制品培养基有几种？ 无
18、菌试验用培养基，菌种保存培养基，鉴别培养基，产菌培养基，产毒培养基，细胞培养基6种。14细胞合成所需氨基酸是什么？ L谷氨酰胺是所有细胞培养液中必不可少的氨基酸成分。15常用合成培养液适用细胞 合成培养液名称 适用细胞 MEM 哺乳动物细胞系 DMEM 多种细胞，特别是杂交瘤细胞 IMEM 肿瘤细胞 HamF10 杂交瘤细胞，二倍体细胞 HamF12 杂交瘤细胞，二倍体细胞 MeCay5A 肿瘤细胞，原代细胞，淋巴细胞 RPMI1640 正常细胞，白血病细胞，肿瘤细胞16生产用注射用水工艺流程： 自来水预处理过滤离子交换微孔过滤超过滤多效蒸馏注射用水 第五章 生物制品的分包装1 生物制品成品保
19、存，除了要注意保温外，还要注意避光。2 无菌室用双碟培养基收杂菌，其中沙门氏培养基主要收阴性小杆菌。3 酒精的杀菌作用，在于使菌体蛋白脱水变性而死。4 生产记录必须填写清楚整齐；需要改时，应更改并签名，且使原数据仍可辨认。5 无菌分装验证试验中选择分装样本应3000瓶。6 无菌分装验证可接受的合格标准为污染率0.1%7 清洁和消毒洁净房间应从高级别到低级别。8 在灌封过程中，应随机，按规定阶段（前中后）抽取样品，贴上瓶签作检定用。9 严格遵循SOP的主要目的是为了把人为的误差降低到最小限度与原设计目的相吻合。10药品应在洁净环境与无菌环境的条件下生产。11药品生产工艺中使用的水，包括饮用水，纯
20、化水，注射用水。12每一生产阶段完成后必须进行清场，并填写记录。13标签，使用说明书按品种、规格专柜（库）存放，凭批包装指令发放，专人保管、领用、销毁、并有发放、使用、销毁记录。14无菌工作服的式样和穿戴方式能包盖全部头发，胡须及脚部，并能阻留人体脱落。15分包装的作用？（1）保护内装物：防止劣化变质，防止破损，防止浸入或泄漏（2）方便使用：单元化包装，多剂量包装，组合包装（3）构成商品，促进销售：一个独立的包装，都有具体的品名、规格、批号、生产日期、有效期以及生产厂家的封口保证。（4）物流合理化16洁净区（室）的布置：人、物流通道分开，保证生产安全，应有28冷库和-25以下低温冰箱等。第六章
21、 安全防护技术1 什么是化学危险品？ 凡是具有燃烧、爆炸、毒害、腐蚀、放射等危险性，并在一定条件下能引起燃烧、爆炸、导致人体中毒、灼伤、死亡等事故和财产受损毁的化学物品均称为化学危险品。2 化学危险品的种类：世界上有化学危险品约6000多种，其中用途广泛的有2000多种。3 化学危险品的分类：我国分为十大类：爆炸品、易燃液体、自燃物品、遇水燃烧物品、易燃固体、压缩气体和液化气体、氧化剂、毒害品、腐蚀物品、放射性物品。4 钢瓶剩余压力的要求：瓶内气体得不用尽，必须留有剩余压力，一般不得小于0.05mPa。5 毒害品有哪些？包括氰化物，氟化钠等。6 氢气与空气的比例是多少会发生爆炸？当两者之比达到
22、4.1% 74.1% 时，遇到明火就会发生爆炸。7 放射性试验室的配置法？采用三区配置法：非活性区，低活性区，高活性区。8 防护监测区的要求：在污染源的周围，要修出大于50米的防护监测区，作为定期监测环境污染的范围。9 何为外源性感染？是指病原体来自感染者体外，包括患者，带菌者，带菌动物及外界环境。10何为内源性感染？是指病原体来自感染者本身，这大多数为体内的正常菌群感染，当机体免疫功能降低或正常菌群平衡失调时引发二重感染。11气溶胶的种类？生物制品生产中产生的气溶胶有三种：滴核、干粉和粉尘。12何为放射性废物放置衰变法？对半衰期短（T1/230天的固体或液体放射性废物，集中放置大约10个半衰
23、，可按一般废物处理。13微生物感染途径有哪些？一般的感染途径有：接触感染，经口感染，动物咬、抓伤和昆虫媒介，经呼吸道吸入。14什么是易燃液体？ 常温下液体存在，具有易燃性和挥发性。闪点在45以下的物品是易燃物品。15爆炸的分类：物理性爆炸、化学性爆炸和混合气体爆炸。16毒物经何途径进入人体？主要经呼吸道、皮肤、消化道等途径进入人体，引起毒害。17放射源的防护：、射线可选用铅、铁、水泥等作为防护屏的材料、射线可采用铝、有机玻璃塑料等作为防护屏材料。18低浓度的放射气体和气溶胶的排放要求：可通过高出周围150米内建筑3米以上的排气烟囱排入大气，经大气扩散稀释后，浓度可低于相应的限制浓度。19如何控
24、制放射源的质和量？ 在不影响效果的情况下，应尽量减少放射源的强度、能量和毒性。20呼吸道防护设备的类型：有密闭型和宽松型两种类型。第七章 细菌类疫苗1细菌性疫苗的定义：用细菌、螺旋体或其衍生物制成，进入人体后，使机体自身产生抵抗相应细菌能力的生物制品，称为细菌类疫苗。2细菌性疫苗除了按细菌名称、按细菌组成成份、按细菌存活状态和按生产工艺进行分类，还可以按给药方法、按疫苗外观、按菌株来源、按菌型数和按治疗疾病的名称进行分类。细菌性疫苗的用途主要用于防止细菌性传染病的发生和流行。细菌性疫苗生产中加入适当佐剂，其优点在于注射次数少，剂量小，可增强疫苗的免疫原性，且接种反应轻微，佐剂种类很多，国内主要
25、使用Al(OH)33工作种子批：有一定数量的来自主种子批经传代、扩增获得的菌株，其生物学特征应于原始种子批一致。工作种子批用于生产疫苗。4百日咳菌可分四种相变，相菌毒力最强，有免疫原性，相菌毒力消失，无免疫原性。根据百日咳菌主要的凝集因子可将相菌分为1、2、3，1、2和1、3三个血清型。百日咳菌种从启开，接种于改良包-姜氏或活性炭半综合培养基上，于35-37培养不超过72小时。经过扩量转种，最后到用于生产时不应超过12代。提取百日咳菌主要保护性抗原FHA和PT，经5%30%蔗糖密度梯度离心去除重液的内毒素，收集轻液的PT和FHA。收获之百日咳菌体混悬于pH7.07.4磷酸缓冲溶液中制成原液，采
26、用最终浓度为0.1%甲醛溶液，放置3723天杀菌脱毒处理。用于生产百日咳疫苗的菌种，在生产前需进行菌种的检定，检定项目有形态及培养特性、血清学试验、皮肤坏死试验、毒力试验和效价测定。百日咳用发酵罐液体培养法生产，收集菌体的方法有两种，一种是离心沉淀法，此法可除去游离的毒性物质；另一种是用酸沉淀法，但此法上清夜中毒性物质有可能同时沉出。百日咳菌的抗原结构比较复杂，除了有耐热的菌体O抗原和不耐热的表面K抗原。百日咳菌还有25种有抗原性的生物学活性物质，其中百日咳毒素；丝状血凝素两种物质是主要的保护性抗原。提纯这两种免疫原制成百日咳组分疫苗。5A群多糖菌苗的生化检定项目有蛋白含量测、核酸含量、磷含量
27、和氧-乙酰基含量。多糖抗原为T细胞不依赖抗原，接种婴幼儿仅产生LgM抗体，而不能产生回忆反应，亦无加强应答这是多糖类疫苗所共存的问题。荚膜多糖是分群的物质基础，根据脑膜炎球双菌和肺炎球菌的荚膜多糖的化学结构及免疫学特征可将脑膜炎球菌分成13个血清群；肺炎球菌可分成84个血清型等，其可分成不同的血清型。生产A群脑膜炎双球多糖疫苗用液体培养基，其培养基配方中不应含有与加入的0.1%十六烷基三甲基溴化铵形成沉淀的成分，亦不应含有对人体有害成分或其他过敏物资。6A群脑膜炎双球多糖疫苗生产工艺中去核酸步骤：上清夜中加入十六烷基三甲基溴化铵。混匀后离心收集沉淀物。将十六烷基三甲基溴化铵-多糖沉淀物均匀地悬
28、浮于蒸馏水内，加等量的2M氯化钙使十六烷基三甲基溴化铵多糖复合物分解，搅拌混悬液1小时，加无水乙醇至最终浓度为25%V/V，沉淀核酸和大量可溶性蛋白，静置3小时，离心去除沉淀，保留完全澄清的上清夜。7脑膜炎双球菌多糖疫苗生产工艺中沉淀多糖步骤：在上清夜内加入乙醇至最终浓度为80%V/V沉淀A群多糖，离心收集沉淀。用一定量的无水乙醇至少洗三次，去除残余十六烷基三甲基溴化铵和氯化钙，沉淀物约再用一定量的丙酮洗二次，真空干燥，将粗制多糖保存在-20以下待进一步精制。8联合疫苗就是采用多种具有免疫原性的抗原制成多价疫苗，一次注射这种疫苗可达到预防的目的。9生物反应器必须具备密封性能良好，可避免一切外来
29、的不需要的微生物污染。它的用途是给动植物细胞或微生物的生长代谢提供一个最优化的环境，从而促使其生长并在其生长代谢过程中产生出最大量最优质的所需产物。微生物发酵的生物反应器，它主要由如下一些部分组成：罐体、搅拌系统、加温和冷却系统、进出气系统、进出液系统、检测和控制系统，管线和接头也是整套设备中不可缺少的组成部分。10霍乱弧菌的抗原结构和其他革兰阴性菌类同，都具有热不稳定的鞭毛抗原和热稳定的菌体抗原。霍乱弧菌菌体抗原即O抗原。鞭毛抗原又称H抗原。菌体抗原的脂多糖（LPS）成分具有血清分型意义。11结核杆菌菌体分胞浆和细胞壁两部分。现已证明胞浆内微粒系核糖体和核糖酸，是产生免疫的有效成分。胞壁是激
30、发机体迟法型变态反应和抗感染免疫的物质基础，也是一种良好的免疫佐剂。12炭疽杆菌的抗原结构可分为菌体抗原、荚膜抗原和毒素抗原三种。菌体多糖抗原免疫动物不能产生保护作用。毒素抗原中的保护性抗原（PA）组份或PA65片段免疫动物均具保护作用，是炭疽有效的保护性抗原。13半合成培养基由天然有机物和化学成份已知的化合物组成。疫苗生产用培养基要求能使细菌保持原有的各种特性，能使细菌扩量繁殖，达到生产的目的。生产菌种用培养基要求能使细菌保持原有的各种特性，又能使菌种达到长期保藏的目的。14卡介苗是从牛体分离的一株牛型结核杆菌，对人有致病力，用加入牛胆汁的甘油土豆培养基传代培养这株结核杆菌，约每23星期传代
31、一次，前后共传代了231代，经约13年时间，终于获得一株独立稳定的减毒株。15在微生物培养过程中需要在线检测的主要物化参数有温度、溶解氧浓度、酸碱度、搅拌速度、罐压和进出液流量。16目前，百日咳疫苗的培养主要以发酵罐培养技术进行生产，请以ApplicomBIO1200型为例，叙述其主要步骤和基本内容。（1）发酵罐的清洁：物理、化学方法清洗（2）培养基的加入和灭菌：一般以120，灭菌2030分钟。（3）菌种接种：以无菌操作方式将扩量制备的菌种压入发酵罐。 （4） 培养：培养参数设定，温度3637；通气总流量100L/min溶氧10%15%；pH7.2；搅拌转速275r/min；培养时间810小时
32、。（5）培养过程中检测：细菌形态；细菌浓度；pH值。17简述多糖疫苗生产通则？ 流脑菌大罐液体培养 液体培养物、离心（分离菌体） 弃去沉淀 上清夜+1%0十六烷基三甲基溴化铵 沉淀抗原沉淀物+0.9M Cacl2溶液 解离、离心 悬液+95%酒精至80% 离心 弃去沉淀物（核酸） 上清+95%酒精至80%离心 沉淀物（初制多糖抗原） 弃去上清抗原抽干溶解于10%饱和醋酸钠溶液+2倍量冷酚溶液离心、此法重复23次 上清液 弃去沉淀物（蛋白）透析（除去残余酚）透析液 超速离心，10万g 3小时 上清液+95%乙醇至75% 弃去沉淀物 离心 弃去上清 沉淀物（精制多糖抗原） 溶解除菌过滤 配制原苗冻
33、干成品第八章 病毒类疫苗1疫苗发展三个时期及三次革命？三个时期：古典疫苗时期；病毒培养疫苗时期；基因重组疫苗时期三次革命：组织培养技术（第一次）；基因重组技术（第二次）；核酸（DNA）疫苗技术（第三次）2疫苗分类（按理化性状分类）： （1）根据有无被灭活分为灭活及减毒活疫苗 （2）根据病毒有无被裂解分为全病毒疫苗、裂解疫苗、亚单位疫苗、表面抗原疫苗等（3）按有无佐剂可分为佐剂疫苗和无佐剂疫苗（4）按疫苗的物理状态可分为液体疫苗、冻干疫苗等3常用病毒培养方法及病毒检测方法？ 病毒培养方法：细胞培养法、鸡胚培养法、动物培养法、病毒检测方法：血清学方法（中和试验、血凝及血凝抑制试验、补体结合实验、酶
34、联免疫吸附试验）外源性病毒检查；活病毒量测定；灭活病毒效力测定。4疫苗的安全性应注意的问题？ 减毒活疫苗防止毒力返祖；灭活疫苗灭活不彻底，后果严重；污染外源因子和致敏原的问题，检查十分重要。5活疫苗与灭活疫苗的优缺点？疫苗种类优 点缺 点活1一般仅通过自然途径免疫一次，可产生广谱的抗体，并具细胞免疫作用1毒株有毒力回升，返祖的危险2可自然传播给接触者疫2产生局部的分泌性lgA，有局部免疫作用。3可能发生严重副反应4有污染外源因子或生物活性物质之可能苗3免疫持久性长，可能在局部消除野型病毒5可因病毒干扰影响免疫效果6不易保存，易被热灭活灭1较为安全1一般需多次接种及加强免疫活疫2能制备多价混合疫
35、苗2不能诱生局部抗体，一般无细胞免疫作用。苗3稳定，耐热性相对较好3需要病毒抗原高浓度6病毒类疫苗生产对毒种和细胞的要求？ 毒种要求：必须经国家药品监督管理局批准。主要质控项目（鉴别试验、病毒外源因子检查、猴体神经毒力试验、免疫原性检查（抗体阳转率或保护率）细胞的要求：原代细胞、二倍体细胞、传代细胞（一般不能用作疫苗生产）、细胞质控7脊髓灰质炎疫苗：属微小核糖核酸病毒科，单股正链RNA，无外膜，病毒对理化因素的抵抗力较强，对有机溶剂不敏感，对温度敏感，56 30分钟即可灭活，-20以下可保存数年。Salk首先用猴睾丸或肾组织培养三个型病毒，经甲醛灭活制成脊髓灰质炎灭活疫苗（IPV），Sabin
36、通过猴组织传代培养和蚀斑筛选方法，研制出三个型的减毒活疫苗（OPV）。我国是从昆明一4岁女孩分离型病毒，用原代猴肾细胞和2BS株人二倍体细胞，剂型是口服糖丸。生产毒种的专项检定：家兔试验（Rct特征与d特征、SV40序列测定）；病毒原液的专项检定：MAPREC试验、猴体神经毒力试验。存在问题：服苗后肠道排毒与有关病例。发展趋势：全球基本消灭，主张使用IPV；开发和使用联合疫苗，如DTP-IPV等；发展重组DNA，如三型嵌合减毒活疫苗等。8减毒活疫苗的生产工艺流程： 人二倍体细胞原代细胞制备 （37静止或转瓶扩增传代） （37静止或转瓶23天） 单层细胞 对照细胞外源因子检查 （弃细胞生长液）
37、（血吸附试验、观察细胞病变） 病毒接种、换液 （3035培养35天） 细胞洗涤、换液（基础液洗涤23次，3035培养，细胞病变达+以上）病毒收获（释放性病毒：单瓶1次收获或再换液培养多次收液） （不易释放性病毒：消化、收集感染细胞）病毒释放及保存（超声波或细胞粉碎机处理感染细胞使病毒释放）（经干冰酒精速冻后置-60以下保存） 病毒原液合并、澄清无菌试验、病毒滴定（单瓶收获病毒液合并后用0.450.6m滤膜澄清过滤）半成品配制无菌试验（加入病毒保护剂或冻干保护剂）分装及冻干 成品检定鉴别试验、物理检查、病毒滴定、 热稳定性试验、无菌试验、水分、异常毒性试验、牛血清蛋白残留量9麻疹疫苗：副粘液病毒
38、群，为RNA病毒，有6条多肽，呈多形态或球形中间是长形核蛋白，外围是脂蛋白，外膜上有两种糖蛋白表面抗原-血凝素与血溶素。对热不稳定，对紫外线和有机溶剂敏感，56 30分钟可被灭活，37半衰期为2小时，4可维持滴度数周，-60以下可保存较长。国内：沪191株1960年上海分离，由原代人胚肾细胞传33代，原代人羊膜细胞传39代，适应到原代鸡胚细胞5代后，将培养温度从37降低到31至底10代后用于疫苗生产。存在问题：原发性免疫与继发性免疫失败；发病年龄后移和小年龄发病；接种后的神经系统反应。发展趋势：开发鼻腔接种和气溶胶疫苗或口服疫苗；使用联合疫苗（MMR）（麻、腮、风）和开发MMRV（麻、腮、风、
39、水痘）；发展重组DNA疫苗，如痘苗病毒载体活疫苗。10腮腺炎疫苗：属副粘液病毒，单股DNA，有囊膜，膜上有糖蛋白构成的血凝素、血溶素和神经氨酸酶。仅有一个抗原型，不耐酸，对有机溶剂敏感，对热极不稳定，5620分钟即可灭活，-60以下可保存较长时间。现国内毒株：S79：1979年上海生物制品研究 所通过国际交往获得JL株病毒，经鸡胚细胞选育建立，1984年获国家批准。国内外多用SPF鸡胚细胞。11风疹疫苗：国内：BRD-株：北京生物制品研究所上世纪80年代分离，经人二倍体细胞（2BS）低温（30）传2630减毒。我国用2BS株和MRC-5株，静止或传瓶培养多次收获病毒液的方法。临床效果：一次免疫
40、的抗体阳转率均95%，90%以上可维持15年。12水痘减毒活疫苗：即水痘带状庖疹病毒（VZV），双链DNA，呈圆形。最外层为糖蛋白和脂质构成的包膜，无血凝素与血溶素。V-Z极为脆弱，对温度、有机溶剂及胃蛋白酶极为敏感。在常温下易被灭活，-70以下较稳定，pH7.8或6.2易失活。疫苗简史：1974年日本首先研制Oka株，1978年比利时史克公司用该株生产疫苗，1981年美国默克公司开始生产Oka株疫苗，于1995年3月获FDA批准。上海所于1996年从日本引进Oka毒株和生产技术，2000年获得生产文号产品上市。Oka株是至今WHO唯一认可的。水痘病毒不易从细胞内释放，需收集感染细胞用超声波等
41、方法处理释放病毒。13甲型肝炎减毒活疫苗：属小RNA病毒科，为单股RNA病毒，球形颗粒，无脂蛋白外膜，对有机溶剂及理化因子的抵抗力较强，对紫外线敏感，耐高温，乙醚和酸碱，604小时不能完全灭活。HAV只有一个血清型。现用毒株：H2株：KMB-17株人二倍体细胞传15代；L-A-1株：经2BS株人二倍体细胞传4代。病毒培养时间长（最长28天左右），需收集感染细胞用冻融或超声波等方法破碎细胞释放病毒。14乙型脑炎减毒活疫苗：单股正链RNA球形病毒，有脂蛋白包膜，有血凝素，含有中和抗体和血凝抑制剂反应的抗原决定簇，Ph79时稳定，加热5630分钟即被灭活，-70保存2年，0.2%甲醛也可灭活。毒株是
42、SA14-14-2，地鼠肾细胞转瓶培养方法。临床使用：8月龄以上健康儿童，7岁时加强1剂。15乙型脑炎灭活疫苗：毒株是P3强毒株，用地鼠肾细胞和Vero细胞转瓶培养方法。临床使用：为减少甲醛引起的疼痛，需加入亚硫酸氢钠溶液中和甲醛后再进行接种。存在问题：动物外源因子问题；副反应发生率较高。16狂犬病疫苗：属弹状病毒科，为单股负链RNA和核蛋白衣壳，有脂蛋白的包膜，血凝素，在pH6.4和4条件下能凝集鹅红细胞。对紫外线、日光和温度敏感，56数10分钟即被灭活，pH小于4或大于7.5易使病毒灭活。“街毒”是疯犬或其它疯动物发病时，存在于痰液内及神经系统中的天然狂犬病毒。“固定毒”是由“街毒”通过家兔脑内生长而对家兔的潜伏期固定于一定天数的减毒株。简史：上世纪50年代开始，研制未经纯化的鸡胚或鸭胚疫苗；60年代末原代地鼠肾细胞灭活疫苗；70年代中期，研制人二倍体细胞培养，1977年WHO推荐使用；80年代出现用其他细胞培养，研究出Vero细胞纯化疫苗；2001年10月，国家又规定必须生产纯化疫苗