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1、. -小檗碱提取及构造鉴定摘要目的：对黄连中的小檗碱成分进展别离纯化与鉴定。方法：采用超声提取、重结晶等手段对样品进展别离、纯化，根据紫外光谱进展化合物构造鉴定。结果：从黄连中别离得到了小檗碱，结论：该方法简单、可行，可为黄连药材及其制剂的质量标准提供对照品。关键词：小檗碱黄连超声提取法构造鉴定紫外光谱薄层色谱Berberine extraction and structure identificationABSTRACTPurpose：Berberine extraction and structure identification；method:berberinewasextractedw
2、iththetechniqueofultrasonicwav andrecrystallization,and identified by UV. Result：gaining Berberin from Coptis;Conclusion:the method is easy and able to provide referencesubstanceforCoptic preparations.Kingword Berberine Coptis Ultrasonicwav Structure identification UV TLC目录摘要1一、文献综述11.题目背景12.研究现状23.
3、提取方法3二、实验目的和意义91.实验研究目的92.实验意义93.题目理论研究价值9三、主要容与实施方案101.主要容102.实验原理103.实验方法104.仪器材料105.实验流程116.实验操作117.预期结果128.实际结果128.定性分析12四、进度方案15五实验总结16五、参考文献17. . word.zl-. -一、文献综述1.题目背景黄连Coptis chinensis Franch为我国名贵中药材之一，享有“中药抗生素美称，其主要功能为清热燥湿、泻火解毒。黄连抗菌能力强，对降热镇痛、抗肠道细菌感染、急性结膜炎、口疮、急性细菌性痢疾等均有很好的疗效，在临床中有较多应用1-3。小檗
4、碱berberine，又称黄连素是从中草药黄连等植物中提取别离得到的一类异喹啉类生物碱，为黄连主要有效成分，其含量约为4%-10%，但根据野生和栽培产地的不同，其含量各异。图1 小檗碱的季铵碱式小檗碱是黄色针状结晶体，能缓慢溶于水1：20，乙醇1：100，较易溶于水、热乙醇，微溶于丙酮、氯仿、苯，几乎不溶于石油醚中。小檗碱的构造式以较稳定的季铵碱为主，其构造式如图1。在自然界，小檗碱多以季铵盐的形式存在，其盐酸盐、氢碘酸盐、硫酸盐、硝酸盐均难溶于水，易溶于热水，且各种盐的纯化都比拟容易。小檗碱是一种常用的广谱抗菌药，具有抗细菌性感染、抗肿瘤、抗心率失常、降压降血糖等成效，在临床上有越来越广泛的
5、应用4。2.研究现状 5 近十年来，已经有2 000多篇国外文献报道了小檗碱及其衍生物在治疗肿瘤、糖尿病、心血管疾病、高血脂、炎症、细菌和病毒感染、脑缺血性损伤、精神疾病、阿尔茨海默病(Alzheimer disease)、骨质疏松等多方面的临床应用、药效机制以及该类化合物的构效关系等研究结果。这些结果表小檗碱生理功能广泛，潜在的构造改造和开发应用价值很大。下面主要从临床应用与药效机制、分子药理、体吸收代、构效关系四个方面来介绍小檗碱及其衍生物的研究进展。2.1 临床应用与药效机制2.1.1 治疗心血管疾病小檗碱有抗心律失常，舒血管，保护心肌，抑制血管增生，抗血小板聚集等作用从而实现对心血管疾
6、病的治疗。减轻大鼠心肌缺血实验中， BBR可显著改善心肌缺血再灌注术后心功能并减轻心肌凋亡及梗死,这种保护作用可被AG阻断(均P0.05)。BBR治疗还可显著提高心肌JAK2及STAT3磷酸化水平,抑制凋亡相关信号分子表达,这种作用也被AG阻断(P0.05)。结论 BBR可显著减轻大鼠MI/R损伤后心肌梗死及凋亡水平,改善心功能,JAK2/STAT3可能介导此作用。2.1.2 降血糖降糖并保护糖尿病大鼠周围神经。黄连生物碱特别是小檗碱通过降低糖尿病大鼠空腹糖、糖化血红蛋白比值和血清甘油三酯和胆固醇水平,提高糖尿病大鼠血浆胰岛素水平。提高坐骨神经感觉和运动传导速度,缩短动作电位潜伏期,调节自由基
7、代紊乱,减轻脂质过化反响抑制多元醇代通路中活性和改善血液高粘状态增加坐骨神经营养因子的表达改善糖尿病大鼠周围神经功能和构造,保护糖尿病周围神经的病变。2.1.3 抗菌抗炎利用不同浓度的小檗碱处理人肠上皮细胞-2,通过测量上皮电位电阻观察细胞严密连接的完整性,并研究小檗碱对严密连接和紧接合蛋白形态学方面作用,说明小檗碱能够减少肠上皮细胞的渗透率,推测小檗碱有抗腹泻活性26。认为小檗碱能够抑制甲状腺机能亢进腹泻小鼠胃肠多肽的提升和黏液分泌,从而起到止泻作用。2.1.4抗肿瘤黄连及其有效成分可通过细胞毒作用抑制肿瘤细胞增殖、诱导细胞凋亡、增强机体免疫功能、调节细胞信号传导、抗氧化、诱导细胞分化等机制
8、发挥抗肿瘤作用。3发现黄连提取物对细胞的生长有浓度依赖性抑制作用,5/黄连提取物能够显著增加细胞对紫杉醇的敏感性。黄连素在体外亦以时间和剂量依赖的方式对细胞产生细胞毒作用并诱导其凋亡。2.1.5 治疗阿尔茨海默病研究发现，小檗碱在无细胞毒性的正常剂量围，能调节人神经胶质瘤细胞中淀粉样前蛋白的形成减少淀粉样蛋白-的产生；增强神经生长因子诱导的神经细胞分化；改善阿尔茨海默病 (Alzheimer disease，AD)模型大鼠空间记忆损伤，增加白介素1 和iNOS表达；还可作为AChE抑制剂，有望成为治疗阿尔茨海默病的药物。2.1.6神经调节已有证据说明,中央多巴胺系统可以介导可卡因的行为强化效应
9、,黄连及其小檗碱可通过调整中央多巴胺系统有效抑制可卡因的行为效应。2.1.7 其他作用小檗碱可增加离体家兔阴茎海绵体平滑肌组织中环磷酸鸟苷(cGMP)和环磷酸腺苷(cAMP)浓度，对阴茎海绵体有即时的舒作用，还对NOcGMP信号通路的下游关键酶(PDE5)具有一定的调控作用，尤其是抑制PDE5A2的mRNA表达，治疗勃起功能障碍。3.提取方法 6 3.1 传统提取技术黄连中小檗碱的提取工艺，主要是溶剂提取法。此法是从中草药中提取有效成分的常用方法，通过浸渍、渗渡、回流等方式将有效成分从药材组织溶解，进展萃取。3.1.1 酸水法提取小檗碱【原理】利用小檗碱的硫酸盐在酸性溶液中的溶解度大、而盐酸盐
10、几乎不溶于水的性质来实现提取别离的，是目前工业中最常用的提取小檗碱的方法之一。【工艺流程为】将黄连药材剪碎、磨烂、加人盛有1%V/V的硫酸水溶液中，加热煮沸约5min后，静置浸泡过夜后渗流、抽滤，滤液加食盐饱和，用稀盐酸调ph至1-2，静置后抽滤即析出盐酸黄连素粗品。将粗品加热水至刚好溶解，用石灰水调ph至8.5-9，趁热滤除杂质，用浓盐酸溶液调ph至2，继续冷却至室温以下即有盐酸小粟碱结晶析出，用冰水洗涤、抽滤，得到黄色盐酸小菜碱结晶，并在50-60下烘干。3.1.2 石灰乳法提取小檗碱石灰乳法也是当前工业生产上常用的方法之一，有渗辘和浸渍两种提取工艺，其流程为将黄连粉碎成粉状，加1/10w
11、/w量的生石灰，再加冷水浸泡静置数小时，抽滤、加人滤液量2%w/w的食盐水，静置沉淀，待沉淀完全后过滤，即得盐酸小檗碱粗品。将粗品加热水至刚好溶解煮沸、冷却、滤除杂质，用浓盐酸溶液调ph至2，继续冷却至室温以下即有盐酸小檗碱结晶析出。晶体用冰水洗涤、抽滤，在50-60下枯燥即得纯度较高的盐酸小檗碱川。稀硫酸法和石灰乳浸渍法是目前比拟成熟的工艺，但工艺中均存在提取时间长、本钱高、产品纯度低、产率低、溶剂消耗多、易造成环境污染等问题。3.1.3 乙醇回流提取法通常用加热回流提取，有直接回流工艺和索氏提取两种。称取黄连粉放入250mL圆底烧瓶中用100mL乙醇作为溶剂，热水浴加热回流30min，放置
12、浸泡1h，将提取液抽滤，滤渣重复上述处理过程两次，合并滤液，减压蒸出乙醇直到为红棕色糖浆状，在红糖浆状物中加人1%V/V的醋酸约30-40mL加热溶解，抽滤除去不溶物，然后于溶液中滴加浓盐酸至溶液浑浊，静置冷却，即有黄色针状的结晶析出，抽滤，先后用冰水和丙酮洗涤滤饼，然后将滤饼加热水至刚好溶解，煮沸、冷却、滤除杂质，继续冷却至室温以下即有盐酸黄连素结晶析出，抽滤、枯燥即得产品。选择不同的提取条件，小檗碱提取率有显著差异，最优提取工艺是50%V/V的乙醇溶液、8倍体积、85回流提取次，每次2h。索氏提取法是直接提取回流工艺的改进，它可以提高产品的收率，减少溶剂的消耗，但索氏提取一般只适用于微型实
13、验。乙醇法提取小檗碱不但从时间、产品纯度、提取率上优于稀硫酸法、石灰乳法，乙醇还可以回收再用，因此，乙醇回流提取工艺是一种从黄连中提取小檗碱较为理想的工艺方法。3.2 新提取技术3.2.1 微波法提取小檗碱微波提取技术是近年来以传统溶剂浸提法原理为根底开展起来的新型萃取技术，该技术具有选择性高、耗时少、能耗低、排污量少等优点，可克制传统提取方法的缺陷，与超临界流体萃取、高速逆流液相色谱等技术相比，其适用面更广，且设备投资低，是目前国外天然产物提取的研究热点。微波处理具有升温快、加热均匀等优势，但其提取技术的研究仍处于初级阶段，在提取过程中的参数如药材的物理性质及粉碎度、根底物化参数的收集，特殊
14、专用微波辅助提取设备的研究开发等都有待探索。3.2.2 微波索氏联合工艺综合微波技术与索氏提取工艺的优点，郭锦棠等，用微波一索氏联合工艺提取了黄连中的小檗碱。选用不同粒度的黄连药材，加人一定量的蒸馏水，混合均匀，在变频微波炉中，以不同水平的微波功率、提取时间进展微波照射，每份样品待其冷却后，重复照射次。微波预处理后，在索氏提取器中以不同水平的提取溶剂用量与提取时间进展提取，将提取液静置过夜，取上清液加盐酸调ph至2，然后参加18%w/w的食盐水，将生成的沉淀静置一段时间后过滤，水洗后在60-80枯燥，得到盐酸小檗碱粗品，计算收率。通过正交实验优选，最正确提取条件为微波功率520W80%功率档，
15、辐照时间1.5min2次，基质含水量20mL，粒度为中粒，溶剂用量100mL，提取时间4h。实验说明微波一索氏联合工艺比单用索氏提取得到的小檗碱收率明显要高与仅用索氏提取方法比拟，微波预处理一索氏联合工艺具有提取效率高、工艺简单等特点。3.2.3 超声波法提取小檗碱利用超声波提取中药材中的有效成分，是中药提取工艺的一次革新。与传统工艺相比，超声波萃取具有如下突出特点：1萃取过程无需高温，不破坏药材成分；2常压萃取，平安性好，操作简单易行；3萃取效率高；4具有广谱性。适用性广，绝大多数的中药材各类成分均可超声萃取；5超声波萃取对溶剂和目标萃取物的性质如极性关系不大；6药材原料处理量大。因此，利用
16、超声萃取中药中有效成分的综合经济效益显著。3.2.4 酶法提取小檗碱酶解技术用于天然产物有效成分提取的研究始于20世纪50年代，由于植物细胞壁主要是由纤维素组成，纤维素酶可以破坏植物细胞壁，使植物组织分解、加速有效成分的释放，促进植物有效成分的浸出。酶法提取小檗碱与传统乙醇浸提法进展比拟，结果说明，酶法提取工艺比传统乙醇浸提法的产量提高了49%。酶法作用条件温和，可明显提高收率，但其技术上尚存在一定的局限性：1酶的最正确温度及最正确ph值往往在一个小围，为到达最正确的活性条件对实验设备有较高要求；2用酶法可能在提取过程中改变中药中某些成分，从而影响产物的纯度及产率。因此，酶法提取工艺有待进一步
17、研究。3.2.5 超临界提取这是近年才开展的一种提取别离技术，它有别于前述的提取法，是一种提取介质不是水或乙醇的特殊技术。机制为：以具有优越传质能力及高溶剂化性能的超临界流体SCF为介质，当SCF与药材接触时，将能溶于SCF的成分从药材中夹带出，从而实现有效成分的提取别离。超临界提取法具有无溶剂残留、操作温度低、有效成分高度浓缩、收率高、药理效果好且毒性降低等特点，但其操作压力大、费用高，目前离大规模应用尚有时日。综上所述，不管是传统工艺还是用其他新技术处理提取黄连中的小粟碱，主要都是根据其易溶于热溶剂而微溶于冷溶剂的性质。在实际生产应用中，可根据回流时间与次数、投料比例、检测设备条件、ph值
18、、提取温度和时间等，采用正交优选设计、均匀设计、回归设计等，选择不同方法进展提取，或以多种提取方法联合运用，最大可能保存活性成分，提高有效组分的提取效率。正在开展和日臻完善的提取新技术，极提高了有效成分的提取率和纯度，降低了能耗，简化了提取工艺，具有广泛的应用前景。3.2.6 连续逆流提取季可可基于ACCE (Alkaloid Continuous Counter-current Extractor)新型连续逆流提取器,建立了连续逆流提取的实验室小试模拟方案,考察采用ACCE新型连续逆流提取器提取黄柏中小檗碱的设备参数,对黄柏药材中小檗碱进展全面的、系统的工艺开发研究,以开发出一套简便易行,环
19、保、低本钱,能够大规模化生产的制备高纯度小檗碱的工艺。本实验取得了以下进展：1.建立了同时分析黄柏中小檗碱、黄柏碱的HPLC/DAD检测方法,通过比拟不同生常年限不同采收期黄柏药材中小檗碱含量和部位(茎皮)的生物量,为幼龄黄柏资源作为小檗碱原料米源的高效合理利用提供了依据。2.建立连续逆流提取的实验室小试模拟方案,为ACCE新型连续逆流中试化提供一种实验室模拟方法,提出该种提取方法的研究思路并设计出连续逆流的实验室小试模拟步骤,考察各项参数,得到理论上生产中可到达的最大提取浓度。3.采用连续逆流提取中试设备使提取终液中小檗碱质量分数到达90.5%。4.该工艺能同时从药材中别离纯化到黄柏酯,黄柏
20、酯质量分数到达91.99%。二、实验目的和意义1. 实验研究目的：1掌握小檗碱的提取别离纯化的方法2掌握小檗碱的纯度检测及构造鉴定2.实验意义通过设计实验让学生能够认识到自己的缺乏，同时提高学生的查阅文献的能力，培养学生独立思考的习惯，通过实际操作提高学生的动手能力以及分析问题，解决问题的能力，加强对相关知识的理解，拓展学生的思维和对专业领域的再认识。3.题目理论研究价值通过查阅文献发现，随着临床药理学的不断深入研究,发现小檗碱具有抗细菌性感染、抗肿瘤、抗心率失常、降压降血糖等成效，更是具有在心血管疾病中有重要的药理作用。因此,提取黄连小檗碱对于临床研究和治疗有着重要的意义。三、主要容与实施方
21、案3.1.主要容：小檗碱的提取及构造鉴定3.2.实验原理：黄连主含小檗碱，含量为5.20%-7.69%，还含黄连碱，甲基黄连碱、掌叶防己碱等，由于它们有相似构造，常统称为黄连生物碱。小檗碱异名为黄连素，在水或稀乙醇中结晶所得小檗碱为黄色针状结晶。游离小檗碱微溶于冷水，易溶于热水，几乎不溶于冷乙醇、氯仿和乙醚。小檗碱和大分子有机酸生成的盐在水中的溶解度都很小。小檗碱有季铵式、醛式、醇式，3种能互变的构造式，以季铵式最稳定。小檗碱的盐都是季铵盐，于硫酸小檗碱的水溶液中参加计算量的氢氧化钡，生成棕红色强碱性游离小檗碱，易溶于水，难溶于乙醚，称为季铵式小檗碱。如果于水溶性的季铵式小檗碱水溶液中参加过量
22、的碱，那么生成游离小檗碱的沉淀，称为醇式小檗碱。如果用过量的氢氧化钠处理小檗碱盐类那么能生成溶于乙醚的游离小檗碱，能与羟胺反响生成衍生物，说明分子中有活性醛基，称为醛式小檗碱。小檗碱的提取方法主要有溶剂法包括水或水有机溶剂法、醇酸水有机溶剂法、碱化有机溶剂法、离子交换树脂法、沉淀法等，通过生物碱特有的沉淀反响和显色反响对其进展鉴别。3.3实验方法：酸水提取小檗碱。利用小檗碱的硫酸盐在酸性溶液中的溶解度大、而盐酸盐几乎不溶于水的性质来实现提取别离的，是目前工业中最常用的提取小檗碱的方法之一。3.4仪器与材料：铁架台1个，50mL，100mL烧杯各2支，抽滤装置1套，250ml锥形瓶滴管1个， 1
23、0mL，25mL量筒各1个，漏斗1个，滤纸假设干，黄连粉100g 0.2稀硫酸，浓HCl 10mL 、碘化铋钾试液、石灰水，丙酮，冰水，黄连粉末3.5 实验流程0,2稀硫酸浸没静置浸泡过夜超声提取3次【最大功率，50】 滤液抽滤 滤渣稀盐酸调ph至1-2静置抽滤析出盐酸小檗碱粗品冰水洗涤2次，丙酮洗涤1次 盐酸小檗碱精品，加热100溶解石灰水调ph8.5-9.8趁热抽滤 滤液加nacl至饱和，静置析晶 小檗碱3.6实验操作1称取100g的黄连粉末用0.2硫酸为提取溶剂浸没，静置过夜。250度下20khz超声提取三次，每次30min。3得到滤液。稀盐酸调ph至1-2，静置，即有盐酸小檗碱析出。4
24、结晶用水洗涤两次，再用丙酮洗涤一次，枯燥、烘干，即得到初品小檗碱。5加热100溶解，石灰水调ph8.5-9.86趁热抽滤，滤液加nacl至饱和，静置即有黄色结晶出现，3.7 预期结果：产品熔点140-150C，纯度在80%以上。实验产品熔点测定小檗碱熔程为145-146如右图熔点测定，说明我组小檗碱杂质过多。小檗碱在高温下被氧化为小檗红碱，左图为小檗红碱的的熔点。3.8定性分析2.8.3薄层色谱法制板、点样、展开、显色：取自制的盐酸小檗碱乙醇样品溶液和盐酸小檗碱乙醇对照品溶液，分别用毛细管点在薄层板上，重复点样35次。用甲醇-丙酮-乙酸4：5：1或氯仿-氨-甲醇30:1:8为展开剂，展开完毕，
25、先观察荧光斑点，再喷改进碘化铋钾试剂显色。如右图薄层谱所示：薄层样点不在同一条线上，说明样品与标准品不是同一种物质。薄层样点不仅有一个，说明存在有杂质。3.9构造鉴定紫外光谱分析紫外检测波长：263nm 供试品溶液的配制：称取小檗碱片细粉Xmg精细称定，参加到100ml容量瓶中。加沸水适量使其溶解，放冷，用水稀释至刻度，摇匀，过滤，弃去初滤液约8ml，精细量取续滤液5ml，置50ml 量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液。对照品溶液的配制：取小檗碱对照品50mg于100ml容量瓶中，加沸水适量使其溶解，放冷，用水稀释至刻度，摇匀，过滤，弃去初滤液约8ml，精细量取续滤液5ml，置50m
26、l 量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液。准确度/回收率试验：取小檗碱片细粉9份，精细称定，每份约为50mg,参加到100ml 容量瓶中。1-3号容量瓶中参加小檗碱对照品30mg左右；4-6号容量瓶中参加小檗碱对照品50mg左右；7-9号容量瓶中参加小檗碱70mg左右。按照供试品溶液配制方法配制成溶液，分别测其紫外吸收峰。紫外吸收光谱与标准品图谱相比，我品紫外图谱有一致的峰型，且最大吸收波长较为一致，与标准图谱较为一致，说明我品中有小檗碱。四、进度方案第一天：领取药材、仪器，准备及清洗药材、仪器，并将黄连粉碎。第二天：将黄连粉末0.2稀硫酸浸泡过夜。第三天：50度下20khz超声提取三
27、次，每次30min，得到滤液。浓盐酸调ph至1-2，静置，即有盐酸小檗碱析出。第四天：结晶用水洗涤两次，再用丙酮洗涤一次，枯燥、烘干，即得到初品小檗碱。第五天：加热100溶解，石灰水调ph8.5-9.8趁热抽滤，滤液加nacl至饱和，静置即有黄色结晶出现，第六天：对所得小檗碱进展质量、熔点测量、纯度检测等。第七天：清洗仪器，完毕实验实验总结本实验总体上来说不是很成功，首先提取出的小檗碱精品的量为1.5g，与黄连中小檗碱成分占总成分的4-10【原料100g】差距较大，同时产品的纯度不够，中间夹杂着小檗红碱等杂质，可见实验操作并不规合理，通过回忆整个实现，可以得出以下原因。产物量少原因:1】0.2
28、稀硫酸浓度不够，不能最大化提取出小檗碱，应用1的稀硫酸提取。2】在粗盐酸小檗碱得出过程中，浓盐酸调ph1-2后，未加盐酸使得静置析晶不充分，滤液中还存在有未能析出的小檗碱。3】在石灰水调ph8.5-9.8，趁热抽滤时，在红棕色的滤液中未加nacl加快析晶，且静置不充分，使得大量的小檗碱在滤液中未能析出。这是导致产物量过少的主要原因。产物不纯原因：1】 实验室中存在有大量粉尘。2】 在过滤除杂中，由于小檗碱产品为粉末，加大的滤纸过滤杂质的难度，使得局部杂质留在产物中。3】 在精品枯燥中，由于对文献资料查询不充分，错误的用烘箱65枯燥，使得大量小檗碱被氧化为小檗红碱。虽然实验不是很成功，总体上收获
29、良多。首先，通过前期的文献查阅，让我了解了很多有关黄连小檗碱的药用价值及药理作用，经过各种实验方案比对，让我对黄连中小檗碱的提取，纯化精制过程有了更深刻的理解，同时对天然药物化学中的相关提取别离知识有了直观的认识，加深我对溶剂提取法的认识。同时经过后期小檗碱的熔点检测，薄层分析，紫外光谱分析，对物质纯度检测流程有了一个较为清晰的认识。在这里，十分感孔教师的关心和殷切指导，在实验过程中，给予我组十分有效可行的意见和建议，让我和我组成员不仅能够顺利完成实验，而且能够实验中获得不菲的收获。感，孔教师，教师您辛苦了，祝您生活愉快，工作顺利。 2016年5月29日六、参考文献 1 不同方法对黄连小檗碱的
30、纯化比拟研究席国萍宋国斌大学医学院现代医药卫生2011年第 27卷第 19期 2 正交试验优选黄连中小檗碱提取工艺的研究圣1,唐丽琴1,明1,矗1,善堂1,王钦茂2,光亮2,敬2,汪友明2(1.省立医院药剂科,市230001;2.中医学院,市230038) 3 黄连素对恶性胶质瘤细胞增殖抑制和诱导凋亡作用佳鑫月婷旦菊花周帅俞飞，立理工大学医学院，；医科大学第二附属医院， 4 于立明,段维勋,国龙,秋芳,王晓武,金振晓,俞世强.小檗碱减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤J. 根底医学与临床. 2016(04) 5 波，朱维良，凯先，小檗碱及其衍生物的研究进展，药学学报，2008，438：773-787 6 黄连活性成分的作用及机制研究进展彩虹1,2,周克元1(1.医学院生物化学与分子生物学研究所,523808;2.天然药物研究与开发重点实验室,524023 7 黄连中小檗碱的超声波提取工艺及数学模拟黄志强,周民杰,毛献萍(贺州学院生化系,XX贺州542800). . word.zl-