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1、精品学习资源试验四 果蝇唾腺染色体的观看温度： 21-24 摄氏度大气压： pa日期：郑元跃学号： 20210322225班级： 14 级生物二班一 目的1、观看果蝇唾腺染色体的形状特点；2、把握剥离果蝇幼虫唾液腺的技术以及制作唾腺染色体玻片标本的方法；3、观看果蝇唾液腺染色体的结构特点及明白果蝇唾腺染色体在遗传学争论中的意义；二 原理双翅目昆虫 摇蚊、果蝇等 幼虫期的唾腺细胞很大，其中的染色体称为唾腺染色体；这种染色体比一般染色体大得多，宽约5um，长约 400um，相当于一般染色体的 100150 倍，因而又称为巨大染色体；唾腺染色体处于体细胞染色体联会配对状态；并且唾腺染色体经过多次复制
2、而并不分开，每条染色体大约有 10004000 根染色体丝的拷贝，所以又称多线染色体；多线染色体经染色后，显现深浅不同、密疏各别的横纹，这些横纹的数目和位置往往是恒定的， 代表着果蝇等昆虫的种的特点；如染色体有缺失、重复、倒位易位等，简单 在唾腺染色体上观看出来；观看多线染色体的特点：巨大；体细胞中同源染色体配对，所以细胞中染色体只可以观测出半数 n；各染色体的异染色质的着丝粒部分相互靠拢形成染色中心 chromocenter；横纹有深浅、疏密的不同，各自对应排列，这意味着基因的排列；果蝇的染色体组成由于在唾腺细胞中 8 条染色体之间以着丝粒相互连结在一起形成染色盘或异染中心和同源染色体之间的
3、假联会，经碱性染料染色后，可以观看到一个染色较深的染色盘和以染色盘为中心向外辐射出的5 条染色体臂；在这些染色体臂上可以看到染色深浅不同，被称为明带和暗带的横纹，这些横纹的位置、宽窄、 数目都具有物种的特异性，不同物种，不同染色体的不同部位形状和位置是固定的，因此依据染色体各条臂带纹特点和各条臂端部带纹的特点能精确识别各条染色体；在染色体臂上仍可看到某些带纹通过染色体的界旋、膨大形成的疏松区和巴尔比尼环，其富含转录出来的RNA，因此不着色，是基因活动的区域；在个体发育的不同阶段，疏松区或巴尔比尼环在染色体上显现的部位不同，因此可以争论基因的表达，开展各种染色体变异的争论等等；黒腹果蝇 Dros
4、ophila melanogaster染色体的组成；有 4 对染色体；其中一对为性染色体 XY 或 XX，XX 染色体为顶端着丝粒欢迎下载精品学习资源染色体，呈杆状， Y 染色体为“ J”形；其次对、第三对染色体均为中心着丝粒染色体，呈“ V”形；第四对染色体短小，为顶端着丝粒染色体，呈点状，附在染色盘边缘；由于唾腺染色体的假联会，X 染色体的一端在异染中心上，另一端游离；而其次对、第三对染色体着丝粒在中心，可以从异染中心呈“V”字形向外舒展出四条臂 2L、2R、3L、3R，Y 染色体着丝粒邻近的异染色质参加了染色中心的形成，所以抱负的片子，不管雌雄果蝇的唾腺细胞在显微镜下均可见五条长臂 X、
5、2L、2R、3L、3R和一条短臂第四条染色体臂不易观看 ；雄果蝇唾腺细胞中的 X 染色体臂比雌果蝇的稍细；在染色体臂上可观看到很多明暗相间的带；黒腹果蝇 Drosophila melanogaster唾腺染色体特点： 1巨大；2体联会现象打算了染色体只有半数；3各个染色体中异染色质多的着丝粒部分相互 靠拢形成染色中心； 4横纹有深浅、数目、疏密的不同，各自对应排列，这意味着基因的排列，具有种的特异性；5多线染色体与中期高度螺旋的染色 体相区分假设有缺失、易位、倒位、重复等现象，很简单在唾腺染色体上识别出来；果蝇唾腺染色体核型图果蝇唾腺染色体模式图果蝇唾腺染色体图欢迎下载精品学习资源三 材料与方
6、法材料：黑腹果蝇 Drosophila melanogaster三龄幼虫用具：显微镜、放大镜、镊子、解剖针、载玻片、盖玻片试剂： 1%醋酸洋红、 HCl、生理盐水方法：1. 剥离唾腺： 在一洁净的载玻片上滴一滴生理盐水，挑选行动缓慢、肥大、爬在瓶壁上即将化蛹的三龄幼虫，或者挑选经低温处理的果蝇三龄幼虫置于载玻片上；每只手各持一个解剖针，在解剖镜下进行操作；由于果蝇的唾腺位于幼虫体前 1/3-1/4处，所以左手持解剖针按压住虫体后端三分之一的部位，固定幼虫，右手持解剖针扎住幼虫头部口器部位，适当用力向右拉唾腺腺体随之而出；唾腺是一对透亮的棒状腺体，外有白色的脂肪组织不透亮；去除幼虫其它组织部分，
7、并把唾腺四周的白色脂肪剥离洁净；2. 解离： 在唾腺组织上滴一滴 1 滴 HCl，解离 1-2min ，以松软组织，利于染色体的分散；3. 染色： 吸去 HCl，用水冲洗 2-3 次后滴加醋酸洋红染液染色 10min；4. 压片： 染色完成后，盖上洁净的盖片，并覆一层滤纸；将片子放在试验台上，用大拇指用力压住，并横向揉几次； 留意不要使盖片移动，用力和揉动是一个方向，不能来回揉；当腺体被染成红色后，用滤纸擦去染液四周一圈的黑 色沉淀物，再用蒸馏水冲洗 23 次，然后加上盖玻片，在盖玻片上方再植盖一层滤纸，用镊子在盖玻片，轻小扣击几下；再用拇指按住盖玻片用力下压，把 腺体细胞压破，把染色体压散开
8、压片时放载玻片的桌面要干，不要使盖片滑 动；制好的玻片标本用蜡封住盖玻片四周以防干燥；经低温冷冻处理的材料经 解离，染色加盖片后不必敲击镜检即可看到分散良好的唾腺染色体5. 镜检：再用高倍镜观看；流程：解剖唾腺转到载玻片上加1 滴 Hcl 解离 1min 吸去 HCl水洗 醋酸洋红染色 10min 盖片、压片镜检留意事项；1. 肯定加生理盐水，否就唾腺易干；2. 将脂肪组织清除洁净；3. 水不行太多，否就幼虫会漂浮而且活跃；4. 染色时间不行过长，否就背景也着色；5. 压片时要揉；6. 染色完以后，将旧的染色液吸去，加新的染色液，再压片；欢迎下载精品学习资源四 结果与分析X2L3L3R42R4
9、0显微镜下看到的结果五 争论与结论所做出的唾腺染色体能观看到有8 条，而且制作的材料都是果蝇的三龄幼虫， 制作的步骤为剥离，解离，漂洗，染色，压片；和前人的做法大致相同，在制作过程中我们没有考虑外界因素的影响，不同条件下染色体的膨松区的结构也会发生变化；每个人和一个所选的三龄幼虫大小不一样，而导致试验结果有差异；在试验的过程中，通过用不同大小的三龄幼虫所拉出的唾腺染色体进行压片观看，通过比照观看结果，发觉越大的三龄幼虫所观看到的染色体越明显，更好的数出染色体条数；能更快的做出试验结果；欢迎下载精品学习资源通过试验中总结与观看，试验中应把握：1位于幼虫体前约三分之一处；2是囊状结构，常附着不透亮
10、的带状脂肪； 3唾腺细胞较大，轮廓清楚；4要将脂肪组织清除洁净，否就影响观看，压片时不能来回揉压；5由于样品难用肉眼观看到，在各步操作过程中如冲洗、吸水等要当心谨慎，以免样品丢失；6把握好染色时间，时间过短就染色成效不明显，时间过长就简单使背景染色，影响观看； 7观看唾液腺染色体制片，查找形状良好、分散适中的图像认真观看染色中心及各条臂的特点；由于短小的第染色体不易观看到，所以常看到明显的5 条臂；雄果蝇的 Y 染色体主要由异染色质组成， 几乎包含在染色中心内，因此雄果蝇的X 染色体臂比雌果蝇的 X 染色体臂要细一些；文献 1J . 安徽农业科学 .2021,3825:13609-13610.
11、 2 J . 生物学通报 .2021,43 4：55-56.3 J . 佳木斯高校学报自然科学版 .2007,253:424-426.4 改进J . 生物学通报 .2021,466:52-53. 5 J . 生物学教学 .2007 ，3210：27-28. 6 J . 生物学通报 .2002,374:62-63.7 邹玉兰、林拥军 . 如何培育具有良好唾腺染色体的果蝇三龄幼虫J.养殖与饲养.2021,7:3-4.8 J . 试验科学与技术 .2007 ，55： 38-52.9 潘新法、许宏庆 .不同浓度的苯酚品红对果蝇唾腺染色体的染色成效J.生物学杂志， 2002,195： 26-2710 杨
12、大翔 .“果蝇唾腺染色体的制备与观看试验”的背景学问J.生物学教学， 2005,304： 37-3911 彭晓云 .果蝇唾腺染色体观看材料的制备 J.生物学通报， 2021,434：55-5612 王华峰、那冬晨 .果蝇唾腺染色体观看试验教学的改革与探究J.试验室科学， 2021,135： 69-7113 刘丽影，刘文雅，邵红 .果蝇唾腺染色体四种染色方法的比较 J.佳木斯高校学报， 2007,253：425-42714 郝大翠，姚明镜，刘焰，蔡明历 .果蝇唾腺染色体试材预备及观看方法的改欢迎下载精品学习资源进J.生物学通报， 2021,454：48-5115 龚慧明.果蝇唾液腺染色体制片应留
13、意的问题J.生物学教学， 2007,3210： 27-2916 洪正树 .猎取果蝇三龄幼虫的简便方法 J.生物学通报， 2002,37462-6317 邹玉兰，林拥军 .如何培育具有良好唾腺染色体的果蝇三龄幼虫J.养殖与饲养， 2021，107：3-518 何兰花，卢家现 .用改进苯酚品红染色液替代醋酸洋红染色液的争论J.生物学杂志， 2000,172： 28-31作业1、何谓多线染色体？答：多线染色体：果蝇的唾腺细胞停止在分裂间期永久间期，染色 体核蛋白纤维不断复制，平行排列形成巨大而舒展的多线染色体唾腺染色体经过多次复制而并不分开，每条染色体大约有 10004000 根染色体丝的拷贝，所以
14、又称多线染色体 polytene chromosome ；核内 DNA 多次复制产生的子染色体平行排列，且体细胞内同源染色体配对，紧密结合在一起，从而阻挡了染色体纤维进一步聚缩，形成体积很大的由多条染色体组成的结构叫多线染色体；多线 化的细胞处于永久间期，体积也相应增大，它存在于双翅目昆虫的幼虫组织内， 如唾液腺、气管等；特点：多线染色体不是生长到肯定程度就进入有丝分裂，而是不断生长，连续复制，而且新的复制体总是沿其全长整齐地与原先的染色体并列着的，因而染色体就生长得极其巨大；例如，在果蝇唾腺细胞中每一个多线染色体都是经过大约 9 个循环的复制产生的，所以每条多线染色体至少包含了500-100
15、0 条单染色体 DNA 纤丝，某些昆虫的多线染色体包含了多达16000 条；经过醋酸洋红或地衣红染色后，在高倍光镜下就可以看到每条多线染色体都是由暗带和明间带直线交替组成的；同时也已证明，大部分DNA 存在于暗区带之内，每条区带都相应于染色体上染色粒的聚合区域，它能被碱性染料染得很深，孚尔根染色出现阳性，而明间带就几乎不着色；以后又证明白每条区带都包括几个或几十个基因位点；2、你如何证明你看到的是唾腺染色体？答：1由于在唾液腺细胞中8 条染色体之间以着丝粒相互连结在一起形成染色盘或异染中心和同源染色体之间的假联会，经碱性染料染色后，可以观察到一个染色较深的染色盘和以染色盘为中心向外辐射出的5
16、条染色体臂； 2在这些染色体臂上可以看到染色深浅不同，被称做明带、暗带的横纹，这些横纹的位置，宽窄、数目都具有物种的特异性；不同物种，不同染色体的不同部位形状位置是固定的；因此依据染色体各条臂带纹特点和各条臂端部带纹特点欢迎下载精品学习资源能精确识别各条染色体；3在染色体臂上仍可看到某些带纹通过染色体的解 旋、膨大形成的疏松区和巴尔比尼氏环，其富含转录出来的RNA，因此不着色；4唾液腺细胞处于永久早期，染色体解旋呈舒展状态在幼虫发育过程中细胞核中的 DNA多次复制，但细胞、细胞核不分裂；复制后的染色单体DNA不分开，从而形成了多线染色体； 5每一臂上全部的横纹的大小和位置是恒定的， 即具有种的
17、特点 ；3. 在昆虫学中，二龄幼虫，三龄幼虫有何生物学意义？生态学意义？遗传学意义？答： 果蝇是完全变态发育的生物之一，二龄幼虫，三龄幼虫是其变态发育的重要特点；从初生卵发育至新羽化的成虫为一个完整的发育周期，在25， 60相对湿度条件下，大约为10 天；通过掌握养殖的温度，可以加速和减缓果蝇的发育；果蝇个体很小，幼虫在三龄时到达最大，约2 毫米，成年果蝇也仅为 23 毫米；新羽化的雌性成虫大约8 小时之后即可进行交配，交配之后大约 40 小时开头产卵，第4-5 天显现产卵高峰；性成熟雌性果蝇生殖才能很强，产卵初期每天可达50 70 枚，累计产卵可达上千枚；黑腹果蝇是最普遍应用于遗传学的果蝇，
18、也是奠定经典遗传学基础的重要模式生物之一，对其染色体组成和表型、基因编码和定位的熟悉，是其它生物无法比拟的；基于清楚的遗传背景和便利的遗传操作，果蝇在发育生物学、生物化学、分子生物学等领域也都占据了不行替代的位置；随着神经科学的兴起，很多遗传操作在该领域不断进展和成熟，为在果蝇中进行神经科学的争论打下了坚实的基础；总之，果蝇在近一个世纪以来的生物学舞台上占有举足轻重的位置，在各个领域的广泛应用使其成为一种抱负的模式生物，不管在已往、现在和将来都将为人类探究生命科学的真谛做出不行磨灭的贡献；4、试着分别设计一个以动物果蝇除外 、植物、微生物为材料的“细胞遗传学试验”；答：动物的“细胞遗传学试验”
19、 ：以小鼠作为试验材料； 方法：1取雄性小鼠，以每克体重4 微克注射秋水仙素约 1mL，14-16h 后，用断 头法处死小鼠，取出睾丸用生理盐水0.9% NaCl 溶液洗去血污，置于解剖盘中；2将睾丸放入装有 1mL 0.3% KCl 溶液的小烧杯中剪碎液体呈乳白色 ；3用铜网过滤到刻度离心管中，再加0.3% KCl 溶液至 4mL；4 37 静置 30mins，低渗处理；5以 800-1000r/min离心 8 分钟；6弃上清液，加入 2mL甲醇冰醋酸固定液；用吸管吹气，轻轻打散细胞，欢迎下载精品学习资源固定 8mins； 7 再以 800-1000r/min离心 8 分钟；8弃上清液，加入
20、 1mL甲醇冰醋酸固定液制成细胞悬液，固定5mins；9取去洁净的低温预冷载片，距10-15cm 的高度滴下 2-3 滴细胞悬液，从一边轻轻吹气，并随时轻小扣打，以使细胞匀称分布和促使染色体绽开；10用滤纸擦去载片上的余外液体，空气干燥或文火干燥，染色30-35mins ；11在显微镜下观看；植物的细胞遗传学试验” ：以豌豆种子为试验材料； 方法：1.取材：将蚕豆种子培育在培育皿内的湿滤纸上，室温或28C 下发芽， 待胚根长达 12cm时，切取 0.5cm 长的根尖部分；2预处理：将切下的根尖浸入 0.1%秋水仙素液中，室温下处理 34h；3水解：把根尖投入预热的5860C 1mol/L热 HCl 中，恒温条件下水解1415min4染色：倒去热 HCl, 滴加卡宝品红少许，染色 510 分钟；5 洗涤： 吸去卡宝品红试剂，用蒸馏水换洗23 次，每次 12min；除去残留染色液后加几滴 45%醋酸；6. 压片：用吸管从醋酸中吸取材料，置洁净载玻片上，材料四周保留半滴45%醋酸，盖上盖玻片，其上放一片吸水纸；左手指压住吸水纸的左边，右手指从吸水纸的左端向右方轻轻抹去，再用铅笔擦头从盖玻片上轻小扣打，使细胞均用散开；7镜检：把压好的片子放在显微镜下进行观看；微生物就以酵母菌欢迎下载