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1、.可编辑修改,可打印别找了你想要的都有！精品训练资料全册教案,试卷,教学课件,教学设计等一站式服务全力满意教学需求,真实规划教学环节最新全面教学资源,打造完善教学模式专题一传统发酵技术的应用课题一果酒和果醋的制作1、发酵：通过微生物技术的培育来生产大量代谢产物的过程；2、有氧发酵：醋酸发酵谷氨酸发酵 无氧发酵：酒精发酵乳酸发酵1.3、酵母菌是兼性厌氧菌型微生物真菌酵母菌的生殖方式：出芽生殖 主要分裂生殖 孢子生殖4、在有氧条件下,酵母菌进行有氧呼吸,大量繁衍；C 6H12 O6 6O2 6CO2 6H2O5、在无氧条件下,酵母菌能进行酒精发酵；C6H12 O6 2C2 H5OH 2CO26、2
2、0左右最相宜酵母菌繁衍酒精发酵时一般将温度掌握在18-25 7、在葡萄酒自然发酵的过程中, 起主要作用的是附着在葡萄皮表面的野生型酵母菌. 在发酵过程中 , 随着酒精浓度的提高 , 红葡萄皮的色素也进入发酵液, 使葡萄酒出现深红色 . 在缺氧 呈酸性的发酵液中, 酵母菌可以生长繁衍,而绝大多数其他微生物都因无法适应这一 环境而受到制约；8、醋酸菌是单细胞细菌 原核生物 , 代谢类型是异养需氧型 , 生殖方式为二分裂9、当氧气、糖源都充分时,醋酸菌将葡萄汁中的糖分解成醋酸；当缺少糖源时,醋酸菌将乙醇变为乙醛,再将乙醛变为醋酸；C2H5OH O2 CH3COOH H2O10、掌握发酵条件的作用醋酸
3、菌对氧气的含量特殊敏锐, 当进行深层发酵时, 即使只是短时间中断通入氧气,也会引起醋酸菌死亡；醋酸菌最适生长温度为 3035,掌握好发酵温度,使发酵时间缩短,又削减杂菌污染的机会；有两条途径生成醋酸：直接氧化和以酒精为底物的氧化；11、试验流程：选择葡萄冲洗榨汁酒精发酵果酒（醋酸发酵果醋）12、酒精检验：果汁发酵后是否有酒精产生,可以用重铬酸钾来检验；在酸性条件下,重铬 酸钾与酒精反应出现灰绿色；先在试管中加入发酵液2L,再滴入物质的量浓度为3mol/L 的 H2SO43 滴,振荡混匀,最终滴加常温下饱和的重铬酸钾溶液3 滴,振荡试管,观看颜色13、充气口是在醋酸发酵时连接充气泵进行充气用的；
4、排气口是在酒精发酵时用来排出二氧 化碳的； 出料口是用来取样的； 排气口要通过一个长而弯曲的胶管与瓶身相连接,其目的是防止空气中微生物的污染；开口向下的目的是有利于二氧化碳的排出；使用该装置制酒时,应当关闭充气口；制醋时,应当充气口连接气泵,输入氧气；疑难解答（ 1）你认为应当先冲洗葡萄仍是先除去枝梗？为什么？应当先冲洗, 然后再除去枝梗, 以防止除去枝梗时引起葡萄破旧,增加被杂菌污染的机会；（ 2）你认为应当从哪些方面防止发酵液被污染？如：要先冲洗葡萄,再除去枝梗；榨汁机、发酵装置要清洗洁净,并进行酒精消毒；每次排气时只需拧松瓶盖,不要完全掀开瓶盖等；（ 3）制葡萄酒时,为什么要将温度掌握在
5、18 25？制葡萄醋时,为什么要将温度掌握在 30 35？温度是酵母菌生长和发酵的重要条件；20左右最适合酵母菌的繁衍；因此需要将温度掌握在其最适温度范畴内；而醋酸菌是嗜温菌,最适生长温度为30 35,因此要将温度掌握在 30 35；课题二 腐乳的制作1、多种微生物参加了豆腐的发酵,如青霉、酵母、曲霉、毛霉等,其中起主要作用的是毛霉；毛霉是一种丝状真菌； 代谢类型是异养需氧型；生殖方式是孢子生殖；营腐生生活；5.2、原理：毛霉等微生物产生的蛋白酶能将豆腐中的蛋白质分解成小分子的肽和氨基酸；脂肪酶可将脂肪水解为甘油和脂肪酸；3、试验流程：让豆腐上长出毛霉加盐腌制加卤汤装瓶密封腌制4、酿造腐乳的主
6、要生产工序是将豆腐进行前期发酵和后期发酵；前期发酵的主要作用：1. 制造条件让毛霉生长；2. 使毛酶形成菌膜包住豆腐使腐乳成型；后期发酵主要是酶与微生物协同参加生化反应的过程；通过各种辅料与酶的缓解作用,生成腐乳的香气；5、将豆腐切成 3cm3cm1cm 的如干块；所用豆腐的含水量为70左右,水分过多就腐乳不易成形； * 水分测定方法如下：精确称取经研钵研磨成糊状的样品5 10g 精确到0.02mg ,置于已知重量的蒸发皿中,匀称摊平后,在100 105电热干燥箱内干燥4h, 取出后置于干燥器内冷却至室温后称重,然后再烘30min ,直至所称重量不变为止；样品水分含量（ %）运算公式如下：烘干
7、前容器和样品质量-烘干后容器和样品质量/烘干前样品质量毛霉的生长：条件：将豆腐块平放在笼屉内,将笼屉中的掌握在15 18,并保持肯定的温度；来源： 1. 来自空气中的毛霉孢子,2.直接接种优良毛霉菌种时间： 5 天加盐腌制：将长满毛霉的豆腐块分层整齐地摆放在瓶中,同时逐层加盐,随着层数的加高而增加盐量,接近瓶口表面的盐要铺厚一些；加盐腌制的时间约为8 天左右；用盐腌制时,留意掌握盐的用量：盐的浓度过低,不足以抑制微生物的生长,可能导致豆腐腐败变质；盐的浓度过高会影响腐乳的口味食盐的作用： 1. 抑制微生物的生长,防止腐败变质2. 析出水分,是豆腐变硬,在后期制作过程中不易酥烂3. 调味作用,给
8、腐乳以必要的咸味4. 浸提毛酶菌丝上的蛋白酶；配制卤汤：卤汤直接关系到腐乳的色、香、味；卤汤是由酒及各种香辛料配制而成的；卤汤中酒的含量一般掌握在12%左右；酒的作用： 1. 防止杂菌污染以防腐2. 与有机酸结合形成酯,给予腐乳风味3. 酒精含量的高低与腐乳后期发酵时间的长短有很大关系,酒精含量越高,对蛋白酶的抑制作用也越大,使腐乳成熟期延长；酒精含量过低,蛋白酶的活性高,加快蛋白质的水解,杂菌繁衍快,豆腐易腐败,难以成块；香辛料的作用： 1. 调味作用 2. 杀菌防腐作用 3. 参加并促进发酵过程防止杂菌污染：用来腌制腐乳的玻璃瓶,洗刷洁净后要用沸水消毒；装瓶时,操作要快速当心；整齐地摆放好
9、豆腐、加入卤汤后,要用胶条将瓶口密封；封瓶时,最好将瓶口通过酒精灯的火焰,防止瓶口被污染；疑难解答（ 1）利用所学的生物学学问,说明豆腐长白毛是怎么一回事？豆腐生长的白毛是毛霉的白色菌丝；严格地说是直立菌丝,在豆腐中仍有匍匐菌丝；（ 2）为什么要撒很多盐,将长毛的豆腐腌起来？ 盐能防止杂菌污染,防止豆腐腐败；（ 3）我们平常吃的豆腐,哪种适合用来做腐乳？含水量为 70%左右的豆腐适于作腐乳；用含水量高的豆腐制作腐乳,不易成形；.（ 4）吃腐乳时,你会发觉腐乳外部有一层致密的“皮”；这层“皮”是怎样形成的呢？ 它对人体有害吗？它的作用是什么？“皮”是前期发酵时在豆腐表面上生长的菌丝（匍匐菌丝）,
10、对人体无害；它能形成腐乳的“体”,使腐乳成形；课题三 制作泡菜制作泡菜所用微生物是乳酸菌,其代谢类型是异养厌氧型；在无氧条件下,降糖分解为8.酶乳酸 ；分裂方式是二分裂；反应式为：C6H12O62C3H6O3+能量含抗生素牛奶不能生产酸奶的缘由是抗生素杀死乳酸菌；常见的乳酸菌有乳酸链球菌和乳酸杆菌；乳酸杆菌常用于生产酸奶；亚硝酸盐为白色粉末,易溶于水,在食品生产中用作食品添加剂；膳食中的亚硝酸盐一般不会危害人体健康,国家规定肉制品中不超过30mg/kg ,酱腌菜中不超过 20mg/kg ,婴儿奶粉中不超过 2mg/kg ；亚硝酸盐被吸取后随尿液排出体外,但在相宜pH 、温度和肯定微生物作用下形
11、成致癌亚硝酸盐含量发酵时间（ d）物质亚硝胺；一般在腌制10 天后亚硝酸盐含量开头降低,故在 10 天之后食用最好* 测定亚硝酸盐含量的原理是在盐酸酸化条件下, 亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化反应后,与N-1- 萘基乙二胺盐酸盐结合形成玫瑰红色染料, 与已知浓度的标准显色液目测比较,估算泡菜中亚硝酸盐含量；专题二微生物的培育与应用课题一微生物的试验室培育培育基： 人们依据微生物对养分物质的不同需求,配制出供其生长繁衍的养分基质,是进行微生物培育的物质基础；培育基依据 物理性质 可分为 液体培育基半固体培育基 和固体培育基 ；在液体培育基中加入凝固剂 琼脂（是从红藻中提取的一种多糖,在配制培育
12、基中用作凝固剂）后,制成琼脂固体培育基； 微生物在固体培育基表面生长,可以形成肉眼可见的菌落；依据菌落的特点可以判定是哪一种菌； 液体培育基 应用于工业或生活生产, 固体培育基 应用于微生物的分别和鉴定, 半固体培育基 就常用于观看微生物的运动及菌种保藏等；依据 成分 培育基可分为 人工合成培育基 和自然培育基 ；合成培育基 是用成分已知的化学物质配制而成, 其中成分的种类比例明确,常用于微生物的分别鉴定；自然培育基 是用化学成分不明的自然物质配制而成,常用于实际工业生产；依据培育基的 用途 ,可将培育基分为 选择培育基 和鉴定培育基 ； 选择培育基 是指在培育基中加入某种化学物质, 以抑制不
13、需要的微生物生长,促进所需要的微生物的生长；鉴别培育基 是依据微生物的特点,在培育基中加入某种指示剂或化学药品配制而成的,用以鉴别不同类别的微生物；培育基的化学成分包括水 、 无机盐 、 碳源 、 氮源 、生长因子 等；碳源：能为微生物的代谢供应碳元素的物质；如CO2、NaHCO3 等无机碳源；糖类、石油、花生粉饼等有机碳源；异养微生物只能利用有机碳源；单质碳不能作为碳源 ；-+氮源：能为微生物的代谢供应氮元素的物质；如N2、NH3、NO3 、NH4 （无机氮源）蛋白质、氨基酸、尿素、牛肉膏、蛋白胨（有机氮源）等； 只有固氮微生物才能利用 N2；培育基仍要满意微生物生长对 PH、特殊养分物质以
14、及氧气的要求；例如,培育 乳酸杆菌时需要在培育基中添加 维生素 ,培育 霉菌时须将培育基的 pH 调至 酸性 ,培育 细菌是需要将pH 调至 中性或微碱性 ,培育 厌氧型微生物 是就需要供应 无氧 的条件无菌技术获得纯洁培育物的关键是防止外来杂菌的入侵,要留意以下几个方面：对试验操作的空间、操作者的衣着和手,进行清洁和消毒；将用于微生物培育的器皿、接种用具和培育基等器具进行灭菌；为防止四周环境中微生物的污染,试验操作应在酒精灯火焰邻近进行；试验操作时应防止已经灭菌处理的材料用具与四周的物品相接触；无菌技术除了用来防止试验室的培育物被其他外来微生物污染外,仍有什么目的？ 答：无菌技术仍能有效防止
15、操作者自身被微生物感染；消毒与灭菌的区分消毒 指使用较为温顺的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物（不包括芽孢和孢子）；消毒方法常用煮沸消毒法 ,巴氏消毒法 （对于一些不耐高温的液体）仍有 化学药剂 （如酒精、氯气、石炭酸等）消毒、紫外线消毒 ；灭菌 就是指使用剧烈的理化因素杀死物体内外全部的微生物,包括芽孢和孢子； 灭菌方法有 灼烧灭菌 、干热灭菌 、高压蒸汽灭菌 ；灭菌方法：接种环、接种针、试管口等使用灼烧灭菌法；玻璃器皿、金属用具等使用干热灭菌法,所用器械是干热灭菌箱；培育基、无菌水等使用高压蒸汽灭菌法,所用器械是高压蒸汽灭菌锅；表面灭菌和空气灭菌等使用紫外线灭菌法
16、,所用器械是紫外灯；比较项理化因素的作用强度毁灭微生物的数量芽孢和孢子能否被毁灭消毒较为温顺部分生活状态的微生物不能灭菌剧烈全部微生物能.制作牛肉膏蛋白胨固体培育基（1） 方法步骤：运算、称量、溶化、灭菌、倒平板；（2） 倒平板操作的步骤：将灭过菌的培育皿放在火焰旁的桌面上,右手拿装有培育基的锥形瓶, 左手拔出棉塞；右手拿锥形瓶,将瓶口快速通过火焰；用左手的拇指和食指将培育皿打开一条稍大于瓶口的缝隙,右手将锥形瓶中的培育基（约 10 20mL）倒入培育皿,左手立刻盖上培育皿的皿盖；等待平板冷却凝固,大约需5 10min；然后,将平板倒过来放置,使培育皿盖在下、皿底在上；倒平板操作的争论1. 培
17、育基灭菌后,需要冷却到50左右时,才能用来倒平板；你用什么方法来估量培育基的温度？提示： 可以用手触摸盛有培育基的锥形瓶,感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时,就可以进行倒平板了；2. 为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？答：通过灼烧灭菌,防止瓶口的微生物污染培育基；3. 平板冷凝后,为什么要将平板倒置？答：平板冷凝后,皿盖上会凝聚水珠,凝固后的培育基表面的湿度也比较高,将平板倒置,既可以使培育基表面的水分更好地挥发,又可以防止皿盖上的水珠落入培育基,造成污染；4. 在倒平板的过程中,假如不当心将培育基溅在皿盖与皿底之间的部位,这个平板仍能用来培育微生物吗？为什么？答：空气中的微生物可能在皿盖与皿
18、底之间的培育基上滋生,因此最好不要用这个平板培育微生物；纯化大肠杆菌（1） 微生物接种的方法最常用的是平板划线法 和稀释涂布平板法 ；（2） 平板划线法是通过接种环在琼脂固体培育基表面连续划线的操作；将集合的菌种逐步稀释 分散到培育基的表面；在数次划线后培育, 可以分别到由一个细胞繁衍而来的肉眼可见的子细胞群体,这就是菌落；（3） 稀释涂布平板法是将菌液进行一系列的梯度稀释,然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培育基的表面,进行培育；分为系列稀释操作 和涂布平板操作 两步；（4） 用平板划线法和稀释涂布平板法接种的目的是：使集合在一起的微生物分散成单个细胞,从而能在培育基表面形成单个的菌落
19、,以便于纯化菌种；（5） 平板划线法操作步骤：将接种环放在火焰上灼烧,直到接种环烧红；在火焰旁冷却接种环,并打开棉塞；将试管口通过火焰；将已冷却的接种环伸入菌液中蘸取一环菌液；将试管通过火焰,并塞上棉塞； 左手将皿盖打开一条缝隙,右手将沾有菌种的接种环快速伸入平板内,划三至五条平行线,盖上皿盖；留意不要划破培育皿；灼烧接种环,待其冷却后, 从第一区域划线的末端开头往其次区域内划线；重复以上操作, 在三、四、13.五区域内划线；留意不要将最后一区的划线与第一区相连；将平板倒置放入培育箱中培育；平板划线操作的争论1. 为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作终止时,仍旧需要灼
20、烧接种环吗？为什么？答：操作的第一步灼烧接种环是为了防止接种环上可能存在的微生物污染培育物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线终止后,接种环上残留的菌种, 使下一次划线时, 接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端,从而通过划线次数的增加, 使每次划线时菌种的数目逐步削减,以便得到菌落；划线终止后灼烧接种环,能准时杀死接种环上残留的菌种,防止细菌污染环境和感染操作者；2. 在灼烧接种环之后,为什么要等其冷却后再进行划线？ 答：以免接种环温度太高,杀死菌种；3. 在作其次次以及其后的划线操作时,为什么总是从上一次划线的末端开头划线？答：划线后,线条末端细菌的数目比线条起始处要少,每次从上一次划
21、线的末端开头, 能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步削减,最终能得到由单个细菌繁衍而来的菌落；（6） 涂布平板操作的步骤：将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中；取少量菌液,滴加到培育基表面；将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃,待酒精燃尽后,冷却8 10s；用涂布器将菌液匀称地涂布在培育基表面；涂布平板操作的争论涂布平板的全部操作都应在火焰邻近进行；结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求,想一想,第 2 步应如何进行无菌操作？提示：应从操作的各个细节保证“无菌”；例如,酒精灯与培育皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰四周；等等；菌种的储存（1） 对于频繁使用的菌种,可以采纳暂时
22、保藏 的方法；暂时保藏方法将菌种接种到试管的固体斜面培育基上,在合适的温度下培育； 当菌落长成后, 将试管放入 4 的冰箱中保藏；以后每3 6 个月,都要重新将菌种从旧的培育基上转移到新奇的培育基上； 缺点 ：这种方法储存的时间不长,菌种简单被污染或产生变异；（2） 对于需要长期储存的菌种,可以采纳甘油管藏 的方法；在 3mL的甘油瓶中, 装入 1mL甘油后灭菌； 将 1mL培育的菌液转移到甘油瓶中,与甘油充分混匀后,放在 20 的冷冻箱中储存；疑难解答（1） 生物的养分养分是指生物摄取、 利用养分物质的过程； 养分物质是指维护机体生命活动,保证发育、生殖所需的外源物质；人及动物的养分物质：水
23、、无机盐、糖类、脂质、蛋白质、维生素六类；植物的养分物质：矿质元素、水、二氧化碳等三类；微生物的养分物质：水、无机盐、碳源、氮源及特殊养分物质五类；（2） 确定培育基制作是否合格的方法将未接种的培育基在恒温箱中保温1 2 天,无菌落生长, 说明培育基的制备是胜利的, 否就需要重新制备；课题二 土壤中分解尿素的细菌的分别与计数尿素是一种重要的农业氮肥,尿素并不能直接被农作物吸取；只有当土壤中的细菌将尿素分解成氨之后,才能被植物利用； 土壤中的细菌之所以能分解尿素,是由于他们能合成脲酶尿素最初是从人的尿液中发觉的选择菌株（1） 试验室中微生物的选择应用的原理人为供应有利于目的菌株生长的条件（包括养
24、分、温度、pH 等）,同时抑制或阻挡其他微生物生长；（2） 选择性培育基在微生物学中, 将答应特定种类的微生物生长,同时抑制或阻挡其他种类微生物生长的培育基,称作 选择培育基 ；（3） 配制选择培育基的依据依据选择培育的菌种的生理代谢特点加入某种物质以达到选择的目的；例如, 培育基中不加入有机物可以选择培育自养微生物；培育基中不加入氮元素, 可以选择培育能固氮的微生物；加入高浓度的食盐可选择培育金黄色葡萄球菌等；统计菌落数目（1） 测定微生物数量的常用方法有稀释涂布平板法 和显微镜直接计数 ；（2） 稀释涂布平板法统计样品中活菌的数目的原理当样品的稀释度足够高时,培育基表面生长的一个菌落,来源
25、于样品稀释液中的一个活 菌；通过统计平板上的菌落数, 就能估量出样品中大约含有多少活细菌；为了保证结果精确, 一般设置 3 5 个平板,选择菌落数在30 300 的平板进行计数,并 取平均值 ；统计的菌落数往往比活菌的实际数目低,因此,统计结果一般用菌落数而不是活菌数来表示；采纳此方法的留意事项： 1. 一般选取菌落数在 30300 之间的平板进行计数2. 为了防止菌落扩散,影响计数,可在培育基中加入TTC 3. 本法仅限于形成菌落的微生物设置对比设置对比的主要目的是排除试验组中非测试因素对试验结果的影响,提高试验结果的可信 度；对比试验是指除了被测试的条件以外,其他条件都相同的试验,其作用是
26、比照试验组, 排除任何其他可能缘由的干扰,证明的确是所测试的条件引起相应的结果；试验设计试验设计包括试验方案,所需仪器、 材料、用具和药品, 详细的实施步骤以准时间支配等的综合考虑和支配；（1） 土壤取样：同其他生物环境相比,土壤中的微生物,数量最大,种类最多；在富含有机质的土壤表层,有更多的微生物生长；从富含有机物、潮湿、pH 7 的土壤中取样；铲去表层土,在距地表约3 8cm 的土壤层取样；（2） 样品的稀释：样品的稀释程度将直接影响平板上生长的菌落数目；在实际操作中,通456常选用肯定稀释范畴的样品液进行培育,以保证获得菌落数在30300 之间、适于计数的平板；测定土壤中细菌的数量,一般
27、选用101010345测定放线菌的数量,一般选用101010234测定真菌的数量,一般选用101010（3） 微生物的培育与观看不同种类的微生物,往往需要不同的培育温度和培育时间；细菌3037 12 天放线菌 2528 57 天 霉菌 2528 34 天每隔 24 小时统计一次菌落数目,选取菌落数目稳固时的记录作为结果,这样可以防止因培养时间不足而导致一楼菌落的数目；一般来说,在肯定的培育条件下（相同的培育基、唯独及培育时间）,同种微生物表现出稳固的菌落特点；外形、大小、隆起程度、颜色疑难解答（ 1）如何从平板上的菌落数估量出每克样品中的菌落数？统计某一稀释度下平板上的菌落数,最好能统计 3
28、个平板, 运算出平板菌落数的平均值每克样品中的菌落数 =（ C/V）*M 其中, C 代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数,V 代表涂布平板时所用的稀释液的体积（ml）, M代表稀释倍数课题三 分解纤维素的微生物的分别纤维素,一种由葡萄糖首尾相连而成的高分子化合物,是地球上含量最丰富的多糖类物质；纤维素与纤维素酶（1） 棉花是自然界中纤维素含量最高的自然产物,木材、作物秸秆等也富含纤维素；（2） 纤维素酶是一种复合酶,一般认为它至少包括三种组分,即 C1 酶、CX酶和葡萄糖苷酶, 前两种酶使纤维素分解成纤维二糖,第三种酶将纤维二糖分解成葡萄糖；纤维素最终被水解成葡萄糖,为微生物的生长供应养分
29、；纤维素分解菌的选择（1） 选择方法：刚果红染色法；能够通过颜色反应直接对微生物进行选择；（2） 刚果红染色法选择纤维素分解菌的原理刚果红是一种染料, 它可以与像纤维素这样的多糖物质形成红色复合物,但并不和水解后的纤维二糖和葡萄糖发生这种反应；当我们在含有纤维素的培育基中加入刚果红时,刚果红能与培育基中的纤维素形成红色复合物；当纤维素被纤维素酶分解后,刚果红纤维素的复合物就无法形成, 培育基中会显现以纤维素分解菌为中心的透亮圈；这样, 我们就可以通过是否产生透亮圈来选择纤维素分解菌；分别分解纤维素的微生物的试验流程土壤取样选择培育 （此步是否需要, 应依据样品中目的菌株数量的多少来确定）梯度稀
30、释将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培育基上选择产生透亮圈的菌落（1） 土壤采集 选择富含纤维素的环境；（2） 刚果红染色法分别纤维素分解菌的步骤倒平板操作、制备菌悬液、涂布平板（3） 刚果红染色法种类一种是先培育微生物, 再加入刚果红进行颜色反应, 另一种是在倒平板时就加入刚果红；课题延长对分解纤维素的微生物进行了初步的选择后,只是分别纯化的第一步, 为确定得到的是纤维素分解菌, 仍需要进行发酵产纤维素酶的试验,纤维素酶的发酵方法有液体发酵 和固体发酵 两种；纤维素酶的测定方法,一般是对纤维素酶分解滤纸等纤维素后所产生的葡萄糖进行定量的测定；疑难解答（1） 为什么要在富含纤维素的环境中查找纤维素
31、分解菌？由于生物与环境的相互依存关系,在富含纤维素的环境中, 纤维素分解菌的含量相对提高,因此从这种土样中获得目的微生物的几率要高于一般环境；（2） 将滤纸埋在土壤中有什么作用？你认为滤纸应当埋进土壤多深？将滤纸埋在土壤中能使纤维素分解菌相对集合,实际上是人工设置纤维素分解菌生存的相宜环境；一般应将纸埋于深约10cm左右腐殖土壤中；（3） 两种刚果红染色法的比较方法一是传统的方法, 缺点是操作繁琐, 加入刚果红溶液会使菌落之间发生混杂；其优点是这样显示出的颜色反应基本上是纤维素分解菌的作用；方法二的优点是操作简便, 不存在菌落混杂问题, 缺点是由于纤维素和琼脂、土豆汁中都含有淀粉类物质,可以使
32、能够产生淀粉酶的微生物显现假阳性反应；但这种只产生淀粉酶的微生物产生的透亮圈较为模糊,由于培育基中纤维素占主要位置,因此可以与纤维素酶产生的透亮圈相区分；方法二的另一缺点是：有些微生物具有降解色素的才能,它们在长时间培育过程中会降解刚果红形成明显的透亮圈,与纤维素分解菌不易区分；（4） 为什么选择培育能够“浓缩”所需的微生物？在选择培育的条件下,可以使那些能够适应这种养分条件的微生物得到快速繁衍,而那些不适应这种养分条件的微生物的繁衍被抑制,因此可以起到“浓缩”的作用；专题三和蛋白质技术 课题一的粗提取与鉴定.提取 DNA的溶解性原理包括哪些方面？DNA在不同浓度DNA在不同浓度NaCl 溶液
33、中溶解度不同；DNA不溶于酒精；NaCl 溶液中溶解度有何特点？要使DNA溶解,需要使用什么浓度？要使DNA析出,又需要使用什么浓度？在 0.14mol/L时溶解度最小；较高浓度可使DNA析出；DNA溶解； 0.14mol/L可使在溶解细胞中的 DNA时,人们通常选用 2mol/LNaCl 溶液； 将 DNA分子析出的方法是向溶有 DNA的 NaCl 溶液中缓慢注入蒸馏水,以稀释NaCl 溶液；酒精是一种常用有机溶剂,但DNA却不能溶于酒精（特殊是95冷却酒精）,但细胞中蛋白质可溶于酒精；从理论上分析, 预冷的乙醇溶液具有以下优点；一是抑制核酸水解酶活性,防止 DNA 降解； 二是降低分子运动
34、, 易于形成沉淀析出； 三是低温有利于增加DNA 分子柔韧性, 削减断裂；采纳 DNA不溶于酒精的原理,可以达到什么目的？将 DNA和蛋白质进一步分别；提取 DNA仍可以利用 DNA对酶、高温顺洗涤剂的耐受性原理；利用该原理时,应选用怎样的酶和怎样的温度值？蛋白酶,由于酶具有专一性, 蛋白酶只水解蛋白质而不会对DNA产生影响；温度值为 6080,由于该温度值蛋白质变性沉淀,而DNA不会变性；补充： DNA的变性是指 DNA分子在高温下解螺旋,其温度在80以上,如在PCR技术中DNA变性温度在 95；洗涤剂在提取 DNA中有何作用？洗涤剂将细胞膜上的蛋白质,从而瓦解细胞膜；当鉴定提取出的物质是否
35、是DNA时,需要使用什么指示剂进行鉴定？ 在沸水浴条件下,DNA遇二苯胺出现蓝色；原理总结： 通过利用不同浓度NaCl 溶液溶解或析出 DNA,可以从细胞中提取和提纯DNA；再利用酒精进一步将DNA与蛋白质分别开来, 达到提纯的目的； 最终利用二苯胺试剂鉴定提取的物质是否是 DNA；试验材料的选取不同生物的组织中DNA含量不同；在选取材料时,应本着DNA含量高、材料易得、便于提取的原就；本试验用鸡血细胞做试验材料有两个缘由；一是由于鸡血细胞核的DNA 含量丰富,材料易得；二是鸡血细胞极易吸水胀破,而用动物肝脏细胞作试验材料经常需要匀浆和离心,对设备要求较高,操作繁琐,历时较长；鸡血细胞破裂以后
36、释放出的DNA ,简单被玻璃容器吸附,所以在提取过程中为了削减DNA 的缺失,最好使用塑料的烧杯和试管盛放鸡血细胞液；破裂细胞,猎取含DNA的滤液如选用鸡血和洋葱作试验材料,就怎样猎取含DNA的滤液？在鸡血细胞液中加入肯定量蒸馏水并用玻棒搅拌,过滤后收集滤液；切碎洋葱,加入一15.定量洗涤剂和食盐,搅拌研磨,过滤后收集滤液；为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？答：蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗液体,水分可以大量进入血细胞内,使血细胞胀裂, 再加上搅拌的机械作用, 就加速了鸡血细胞的破裂细胞膜和核膜的破裂 ,从而释放出 DNA ；在以上试验中,加入蒸馏水、洗涤剂和食盐的作用分别是什么？过滤时应当
37、选用（滤纸、尼龙布）；血细胞在蒸馏水中大量吸水而张裂；洗涤剂瓦解细胞膜；食盐溶解DNA物质；选用尼龙布进行过滤；在处理植物组织时需要进行研磨,其目的是什么？研磨不充分产生什么结果？破裂细胞壁,使核物质简单溶解在NaCl 溶液中；研磨不充分会使DNA的提取量削减,影响试验结果,导致看不到丝状沉淀物、用二苯胺鉴定不显示蓝色等；详细做法； 10mL 鸡血 20mL蒸馏水同方向搅拌3 层尼龙布过滤滤液去除滤液中的杂质为什么反复地溶解与析出DNA ,能够去除杂质？用高盐浓度的溶液溶解DNA ,能除去在高盐中不能溶解的杂质；用低盐浓度使DNA 析出,能除去溶解在低盐溶液中的杂质；因此,通过反复溶解与析出D
38、NA ,就能够除去与DNA 溶解度不同的多种杂质；最初获得的 DNA滤液含有蛋白质、脂质等杂质,需要进一步提纯DNA；方案一的原理是 DNA在不同浓度 NaCl 溶液中溶解度不同；方案二的原理是蛋白酶分解蛋白质,不分解 DNA；方案三的原理是蛋白质和DNA的变性温度不同；方案二与方案三的原理有什么不同？答：方案二是利用蛋白酶分解杂质蛋白,从而使提取的DNA 与蛋白质分开；方案三利用的是 DNA 和蛋白质对高温耐受性的不同,从而使蛋白质变性,与DNA 分别；析出与鉴定在滤液中仍旧含有一些杂质,怎样除去这些杂质呢？得到的DNA呈何颜色？ 滤液与等体积的冷却酒精混合匀称,静置2 3 分钟,析出的白色
39、丝状物就是 DNA；DNA呈白色；怎样鉴定析出的白色丝状物就是DNA呢？详细做法；试管 2 支,编号甲乙各加等量5mLNaCl 溶液甲中放入少量白色丝状物,使之溶解各加4mL二苯胺,混合匀称沸水浴5min观看颜色变化试验操作制备鸡血细胞液加柠檬酸钠,静置或离心破裂细胞,释放 DNA 加蒸馏水,同一方向快速通方向搅拌过滤,除去细胞壁、细胞膜等；溶解核内 DNA 加入 NaCl 至 2mol/L ,同一方向缓慢搅拌DNA析出加蒸馏水至 0.14mol/L ,过滤,在溶解到2mol/L 溶液中除去细胞质中的大部分物质；.DNA初步纯化与等体积 95冷却酒精混合,析出白色丝状物除去核蛋白、RNA、多糖
40、等；DNA鉴定二苯胺,沸水浴,出现蓝色留意事项：在鸡血中加入柠檬酸钠防止凝固；鸡血静置或离心以提高细胞悬液浓度；使用塑料烧杯； 使用尼龙布过滤； 玻棒沿同一方向搅拌； 玻棒搅拌要缓慢 （细胞破裂快速搅拌） ； 玻棒不要遇到烧杯壁；二苯胺试剂要现用现配等；.一、试验原理课题二 酵母细胞的固定化1. 使用固定化酶技术,将这种酶固定在一种颗粒状的载体上,再将这些酶颗粒装到一个反应柱内,柱子底端装上分布着很多小孔的筛板；酶颗粒无法通过筛板的小孔,而反应溶液却可以自由出入；生产过程中, 将葡萄糖溶液从反应柱的上端注入,使葡萄糖溶液流过反应柱,与固定化葡萄糖异构酶接触,转化成果糖,从反应柱的下端流出；反应
41、柱能连续使用半年,大大降低了生产成本, 提高了果糖的产量和质量；2. 固定化酶和固定化细胞是利用物理或化学方法将酶或细胞固定在肯定空间内的技术,包括 包埋法、化学结合法和物理吸附法；一般来说, 酶更适合采纳 化学结合法和物理吸附法固定,而细胞 多采纳 包埋法 固定化；这是由于细胞个大, 而酶分子很小；个大的难以被吸附或结合,而个小的酶简单从包埋材料中漏出；固定化酶优点：使酶既能与反应物接触,又能与产物分别,仍可以被反复利用；固定化细胞优点：成本更低,操作更简单,可以催化一系列的化学反应；二、试验步骤1；细胞的活化称取 lg 干酵母,放入 50 mL 的小烧杯中,加人蒸馏水10 mL,用玻璃棒搅
42、拌,使酵母细胞混合匀称,成糊状,放置1h 左右,使其活化；【注】活化：让处于休眠状态的微生物重新复原正常的生活状态2；配制物质的量浓度为0.05mo1/L 的 CaCl2 溶液称取无水 CaCl2 0.83g ；放人 200mL的烧杯中,加入 150mL的蒸馏水,使其充分溶解,待用；3；配制海藻酸钠溶液称取 0.7g 海藻酸钠, 放入 50mL小烧杯中； 加人 10mL水,用酒精灯加热, 边加热边搅拌, 将海藻酸钠调成糊状,直至完全溶化,用蒸馏水定容至10 mL；留意,加热时要用小火,或者间断加热,反复几次,直到海藻酸钠溶化为止；4；海藻酸钠溶液与酵母细胞混合将溶化好的海藻酸钠溶液冷却至室温,
43、加人已活化的醉母细胞,进行充分搅拌,使其混合匀称,再转移至注射器中；【注】冷却至室温的目的：防止杀死酵母菌5；固定化酵母细胞以恒定的速度缓慢地将注射器中的溶液滴加到配制好的CaCl2 溶液中,观看液滴在 CaCl2溶液中形成凝胶珠的情形；将这些凝胶珠在CaCl 2 溶液中浸泡 30 min 左右；【注】 CaCl2 溶液的作用：使胶体聚沉6 使用固定化酵母细胞发酵a) 将固定好的酵母细胞 凝胶珠 用蒸馏水冲洗 2-3 次；b) 将 150mL质量分数为 10%的葡萄糖溶液转移到200mL的锥形瓶中,再加入固定好的酵母细胞,置于 25下发酵 24h；三、留意事项1. 配制海藻酸钠溶液：小火、间断
44、加热、定容,假如加热太快,海藻酸钠会发生焦糊；2. 海藻酸钠溶液与酶母细胞混合：冷却后再混合,留意混合匀称,不要进入气泡3. 制备固定化酵母细胞：高度相宜,并匀速滴入4. 刚形成的凝胶珠应在CaCL 2 溶液中浸泡一段时间,以便 Ca2+与 Na+充分交换,形成13的凝胶珠稳固； 检验凝胶珠是否形成, 可用以下方法： 用镊子夹起一个凝胶珠放在试验桌上用手挤压, 假如不简单破裂, 没有液体流出就说明胜利地制成了凝胶珠,仍可以用手将凝胶珠在试验桌上用力摔打,假如凝胶珠很简单弹起,也说明制备的凝胶珠是胜利的； 5凝胶珠的颜色和外形假如制作的 凝胶珠颜色过浅、呈白色,说明 海藻酸钠的浓度偏低, 固定的酵母细胞数目较少 ；假如形成的 凝胶珠不是圆形或椭圆形,就说明 海藻酸钠的浓度偏高,制作失败, 需要再作尝试；课题三血红蛋白的提取和分别一、试验原理蛋白质的物化理性质：外形、大小、电荷性质和多少、溶解度、吸附性质、亲和力等千差万别,由此提取和分别各种蛋白质；1. 凝胶色谱法（安排色谱法） ：（ 1）原理：分子量大的分子通过 多孔凝胶颗粒的间隙 , 路程短 , 流淌快 ；分子量 小的分子穿过 多孔凝胶颗粒内部,路程长,流淌慢；（2）凝胶材料：多孔性,多糖类化