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1、二级生物安全实验室二级生物安全实验室操作规范操作规范 实验室生物安全的概念 是指在从事病原微生物实验活动中避免病原微生物对工作人员和相关人员的危害,对环境的污染和对公众的伤害,为了保证试验研究的科学性还要保护试验因子免受污染.其措施包括强化工作和管理人员生物安全意识,建立规范化、法制化和日常化的管理体系，加强人才的建设培训，配备必要的物理、生物防护设施、设备，掌握规范和微生物操作技术和方法等等。切记切记： 仅有先进的设施、设备和装备还不足以仅有先进的设施、设备和装备还不足以保证实验室的生物安全，作为实验室活保证实验室的生物安全，作为实验室活动主体的操作者必须履行良好的行为规动主体的操作者必须履
2、行良好的行为规范才能最大限度保证实验室的生物安全。范才能最大限度保证实验室的生物安全。 良好的生物安全实验室技术规范要满足良好的生物安全实验室技术规范要满足保护操作者和实验环境的要求，必要时保护操作者和实验环境的要求，必要时还要考虑对操作对象的保护。还要考虑对操作对象的保护。 对于良好的实验室操作技术规范每个操作者对于良好的实验室操作技术规范每个操作者都必须时刻铭记在心。都必须时刻铭记在心。 对于每一个新进入实验室的工作人员都应该对于每一个新进入实验室的工作人员都应该给予严格的训练，以使其掌握正确的要领，给予严格的训练，以使其掌握正确的要领，避免养成不良的习惯，从而保证以正确的意避免养成不良的
3、习惯，从而保证以正确的意识、操作技术和工作习惯展开工作。识、操作技术和工作习惯展开工作。 养成正确的生物安全意识非常重要，它可以养成正确的生物安全意识非常重要，它可以使操作者最大限度的保护自己，避免失误和使操作者最大限度的保护自己，避免失误和事故的发生，哪怕即使发生意外，也会进行事故的发生，哪怕即使发生意外，也会进行妥善的处理。妥善的处理。 从事实验活动都应遵循下列基本从事实验活动都应遵循下列基本原则：原则： 不管是谁，从事实验活动都应遵循下列基不管是谁，从事实验活动都应遵循下列基本原则：本原则：所有操作人员必须经过培训，通过考核，所有操作人员必须经过培训，通过考核，获得上岗证书；获得上岗证书
4、；在开始相关工作之前，应对所从事的病原在开始相关工作之前，应对所从事的病原微生物和其他危险物质以及相关操作进行微生物和其他危险物质以及相关操作进行危险评估，根据国家对于各种微生物操作危险评估，根据国家对于各种微生物操作的危险等级划分和防护要求以及危险评估的危险等级划分和防护要求以及危险评估的结果，制定全面、细致的标准操作规程的结果，制定全面、细致的标准操作规程和程序文件。和程序文件。 对于关键的危险步骤设计出可行的防护对于关键的危险步骤设计出可行的防护措施；措施； 熟悉各级生物安全实验室运行的一般熟悉各级生物安全实验室运行的一般规则，掌握各种仪器、设备、装备的操规则，掌握各种仪器、设备、装备的
5、操作步骤和要点，进行正确的操作和使用，作步骤和要点，进行正确的操作和使用，对于各种可能的危害应非常熟悉；对于各种可能的危害应非常熟悉； 应掌握各种感染性物质和其他危险物应掌握各种感染性物质和其他危险物质操作的一般准则和技术要点。质操作的一般准则和技术要点。 实验室的生物安全技术规范，包括但不实验室的生物安全技术规范，包括但不仅限于实验室运行的基本规范、仪器设仅限于实验室运行的基本规范、仪器设备的使用规范、针对感染性材料、危险备的使用规范、针对感染性材料、危险化学品、放射性核素等的操作规范以及化学品、放射性核素等的操作规范以及个人防护用品的使用规范等。个人防护用品的使用规范等。 一、生物安全实验
6、室运行的基本一、生物安全实验室运行的基本规范规范 这些规范不能代替各实验室的规章制度、这些规范不能代替各实验室的规章制度、程序文件和标准操作程序。各个实验室程序文件和标准操作程序。各个实验室应遵照国家有关法律、法令、标准和规应遵照国家有关法律、法令、标准和规定，结合实际情况来制定相应的管理文定，结合实际情况来制定相应的管理文件和标准操作程序，确保实验室生物安件和标准操作程序，确保实验室生物安全符合国家的有关要求。全符合国家的有关要求。一）一）BSL-2实验室人员控制规范实验室人员控制规范实验室的进入实验室的进入实验室负责人应根据要求对进入实验室的人实验室负责人应根据要求对进入实验室的人员加以控
7、制。未经批准或允许，任何人不得员加以控制。未经批准或允许，任何人不得擅自进入实验室。严禁儿童进入实验室工作擅自进入实验室。严禁儿童进入实验室工作区域。区域。 不允许可能增加获得性感染的危险性或不允许可能增加获得性感染的危险性或感染后可能引起严重后果的人员进入实验室感染后可能引起严重后果的人员进入实验室或感染动物房。或感染动物房。BSL-2实验室门上应标有国际通用的生实验室门上应标有国际通用的生物危害警告标志，包括通用的生物危险物危害警告标志，包括通用的生物危险性标志，标明传染因子、实验室负责人性标志，标明传染因子、实验室负责人或其他人员姓名、电话以及进入实验室或其他人员姓名、电话以及进入实验室
8、的特殊要求。的特殊要求。实验室的门应保持关闭状态。实验室的门应保持关闭状态。与实验工作无关的动物不得带入实验室。与实验工作无关的动物不得带入实验室。二）二）工作人员的防护规范工作人员的防护规范在实验室工作时，必须穿戴合适的工在实验室工作时，必须穿戴合适的工作服或防护服。作服或防护服。工作人员可能接触到血液、体液以及工作人员可能接触到血液、体液以及其他具有潜在感染性的材料或感染性其他具有潜在感染性的材料或感染性动物以及其他有害物质的操作时，应动物以及其他有害物质的操作时，应戴上合适的手套。手套用完后，应先戴上合适的手套。手套用完后，应先消毒再摘除，随后必须洗手。消毒再摘除，随后必须洗手。在处理完
9、感染性实验材料和动物以及其在处理完感染性实验材料和动物以及其他有害物质后，以及在离开实验室工作他有害物质后，以及在离开实验室工作区域前，都必须洗手。区域前，都必须洗手。为了防止眼睛或面部受到喷溅物的污染、为了防止眼睛或面部受到喷溅物的污染、碰撞或人工紫外线辐射的伤害，必须戴碰撞或人工紫外线辐射的伤害，必须戴合适的安全眼镜、面罩或其他防护设备。合适的安全眼镜、面罩或其他防护设备。严禁穿着实验防护服离开实验室工作区严禁穿着实验防护服离开实验室工作区域。域。不得在实验室内穿露脚趾的鞋。不得在实验室内穿露脚趾的鞋。禁止在实验室工作区域进食、饮水、吸禁止在实验室工作区域进食、饮水、吸烟、化妆和处理角膜接
10、触镜。烟、化妆和处理角膜接触镜。禁止在实验室工作区域储存食品和饮料。禁止在实验室工作区域储存食品和饮料。在实验室内用过的防护服不得和日常服在实验室内用过的防护服不得和日常服装放在同一柜子内。装放在同一柜子内。三）三）有关操作的指导原则有关操作的指导原则严禁用口吸移液管，严禁将实验室严禁用口吸移液管，严禁将实验室材料置于口内。严禁舔标签。材料置于口内。严禁舔标签。所有的实验操作要按尽量减少气溶所有的实验操作要按尽量减少气溶胶和微小液滴形成的方式来进行。胶和微小液滴形成的方式来进行。应限制使用注射针头和注射器。除应限制使用注射针头和注射器。除了进行肠道外注射或抽取实验动物了进行肠道外注射或抽取实验
11、动物体液外，注射针头和注射器不能用体液外，注射针头和注射器不能用于移液或用作其他用途。于移液或用作其他用途。污染的液体在排放到生活污水管道以前污染的液体在排放到生活污水管道以前必须清除污染（采用化学或物理学方必须清除污染（采用化学或物理学方法）。根据所处理的微生物因子的危险法）。根据所处理的微生物因子的危险评估结果准备专门的污水处理系统。评估结果准备专门的污水处理系统。只有保证在实验室内没有受到污染的文只有保证在实验室内没有受到污染的文件纸张才能带出实验室。件纸张才能带出实验室。四）四）实验室工作区的管理原则实验室工作区的管理原则实验室应保持清洁整齐，严禁摆放和实验室应保持清洁整齐，严禁摆放和
12、实验无关的物品。实验无关的物品。每天工作结束后应清除工作台面的污每天工作结束后应清除工作台面的污染。若发生具有潜在危险性的材料溢染。若发生具有潜在危险性的材料溢出应立即清除污染。出应立即清除污染。所有受到污染的材料、标本和培养物所有受到污染的材料、标本和培养物在废弃或清洁再利用之前，必须先清在废弃或清洁再利用之前，必须先清除污染。除污染。感染性材料的包装和运输应遵循国家和感染性材料的包装和运输应遵循国家和/或国际的相关规定。或国际的相关规定。如果窗户可以打开，则应安装防止节肢如果窗户可以打开，则应安装防止节肢动物进入的纱窗。动物进入的纱窗。五）五）生物安全管理的指导原则生物安全管理的指导原则实
13、验室负责人负责制订和采用生物安全实验室负责人负责制订和采用生物安全管理计划以及实验室安全或管理计划以及实验室安全或/和操作手和操作手册。册。实验室应当能提供常规的实验室安全培实验室应当能提供常规的实验室安全培训，并建立培训制度。训，并建立培训制度。实验室负责人（或生物安全负责人）要实验室负责人（或生物安全负责人）要将生物安全实验室的特殊危害告知实验将生物安全实验室的特殊危害告知实验室人员，同时要求他们阅读生物安全或室人员，同时要求他们阅读生物安全或/和操作手册。所有实验室人员必须经和操作手册。所有实验室人员必须经过培训，了解所从事工作的危险、掌握过培训，了解所从事工作的危险、掌握有关的管理规定
14、和操作手程序，通过考有关的管理规定和操作手程序，通过考核后方可从事相关实验室工作。核后方可从事相关实验室工作。应当制订节肢动物和啮齿动物的控制方应当制订节肢动物和啮齿动物的控制方案。案。如有必要，应为所有实验室人员提供适如有必要，应为所有实验室人员提供适宜的医学评估、健康监测和治疗，并建宜的医学评估、健康监测和治疗，并建立健康档案。立健康档案。实验室人员应接受与所操作生物因子或实验室人员应接受与所操作生物因子或实验室内潜在的生物因子相关的免疫接实验室内潜在的生物因子相关的免疫接种或检测。种或检测。二、实验室仪器设备的使用规范 仪器设备的不正确使用往往会造成有害物质的泄漏、个人伤害甚至于发生实验
15、室感染，因此规范实验室仪器的使用是保证实验室生物安全的关键环节之一。设备使用和操作规程设备使用和操作规程 使用程序使用程序 维护程序维护程序 检定程序检定程序 校准程序校准程序 报废程序报废程序1 1、生物安全柜的使用、生物安全柜的使用 一、操作程序一、操作程序一）一）II级生物安全柜内的准备工作级生物安全柜内的准备工作 在开始工作之前，准备一张特别的活动所需的材料检查清单，在生物安全柜内的放置必要的材料。因为安全柜的气幕防护屏障是很脆弱的，做好充分的准备是为了在正式工作时减少手臂穿越气幕的运动次数。 操作者手臂横向快速地进出安全柜会干扰气幕，并损害安全柜所提供的局部防护屏障。手臂垂直于安全柜
16、的操作口，进出时缓慢的移动，将减少这种危险。房间其他人员的活动（例如，迅速运动，开、关房间门等）也同样可以干扰安全柜的空气保护屏障。 在开始工作之前，操作者应该调整凳子高度，使自己的脸在前操作口之上。 在手臂放进安全柜内大约一分钟之后，才能进行实验操作。这样可以使安全柜稳定，并且能让气流“清扫”掉手和臂表面的微生物污染物。 当操作者的胳膊横放在前面的格栅上的时候，房间空气可能直接流动到安全柜的工作区域，而不是通过前面的格栅进风。轻微地提高胳膊会缓和这个问题。 前面的格栅绝对不能让研究记录、废弃的塑料包装和吸液装置等阻挡。 所有的操作应该在距离前面的格栅4英寸里面的工作面上进行。 二）工作前的净
17、化二）工作前的净化 在开始工作之前要让安全柜的风机至少运行3-5分钟使安全柜内的空气进行净化。 安全柜的工作台面、内壁（不包括送风滤器扩散板）和观察窗的内表面用消毒剂擦拭。 再用无菌蒸馏水进行擦拭以清除残余的消毒剂。 放到安全柜的容器和材料的表面应该以70%的乙醇擦拭，以减少将环境的杂菌带到安全柜内。 定期的对孵箱和冰箱进行消毒三）生物安全柜内部材料的放置三）生物安全柜内部材料的放置 在安全柜的工作台面上可以放一块塑料衬底的能吸水的毛巾。 所有的材料应该放在离安全柜前面的格栅和后面工作台面的边缘尽可能远的位置。 容易产生气溶胶的设备（例如，旋转搅拌器，台式离心机）应该靠近安全柜的后部放置。 操
18、作时的动作应该从工作台面的清洁区到污染区。安全柜内材料的放置安全柜内材料的放置洁净培养物（左边）可以进行接种（中心）；用过的污染吸管放在浅的平底盘里，而其它污染的材料可以放在生物危害包（右边）中。这安排对于习惯于左手操作的人要颠倒过来。 洁净污染四）四）II级生物安全柜内的操作级生物安全柜内的操作 在生物安全柜内所进行的许多普通过程可能产生喷溅或气溶胶。应该始终采用良好的微生物学技术，减少喷溅和气溶胶产生。 II级生物安全柜的设计可以使水平方向喷出的孢子在14英寸的传播距离以内被安全柜向下流动的气流所俘获。 因此，保持干净的材料离开产生气溶胶的活动至少1英尺以外将会减少交叉污染的可能性。五）消
19、毒五）消毒 表面消毒表面消毒 工作完成时，所有的容器和设备应该进行工作完成时，所有的容器和设备应该进行表面消毒并拿出安全柜。在每天工作结束表面消毒并拿出安全柜。在每天工作结束时，应该对安全柜进行最后的表面消毒，时，应该对安全柜进行最后的表面消毒，包括工作台面、安全柜的边壁、后壁和观包括工作台面、安全柜的边壁、后壁和观察窗玻璃内部的擦拭。如果必要，安全柜察窗玻璃内部的擦拭。如果必要，安全柜也应该进行放射性检测并进行必要的消毒。也应该进行放射性检测并进行必要的消毒。 作为安全的微生物学操作的最后步骤，操作为安全的微生物学操作的最后步骤，操作者应该摘下手套、脱下工作服并且洗手。作者应该摘下手套、脱下
20、工作服并且洗手。 六）发生少量的喷洒时的消毒六）发生少量的喷洒时的消毒 在生物安全柜内发生少量的喷洒时，应在生物安全柜内发生少量的喷洒时，应该用污染清除吸收纸巾立即进行处理，该用污染清除吸收纸巾立即进行处理，并将使用过的纸巾放到这个生物危害包并将使用过的纸巾放到这个生物危害包里。里。 对安全柜内的所有物品和安全柜内部，对安全柜内的所有物品和安全柜内部，用浸满消毒液的毛巾立即进行擦洗。用浸满消毒液的毛巾立即进行擦洗。 七）发生大量的溢出七）发生大量的溢出 当发生大量的溢出时，液体会通过前面或后部当发生大量的溢出时，液体会通过前面或后部的格栅流到下面去，这时要求更广泛的消毒。的格栅流到下面去，这时
21、要求更广泛的消毒。安全柜内的所有的物品应该进行表面消毒并拿安全柜内的所有的物品应该进行表面消毒并拿出安全柜。出安全柜。 应该使消毒液维持应该使消毒液维持20-30分钟的适当接触时间分钟的适当接触时间 如果溢出的液体含有放射性材料，可采取类似如果溢出的液体含有放射性材料，可采取类似的程序。并应该与辐射安全人员联系，寻求特的程序。并应该与辐射安全人员联系，寻求特殊的指导。殊的指导。八）气体消毒八）气体消毒 在更换在更换HEPA过滤器或进行内部维修过滤器或进行内部维修之前，要对生物安全柜必须进行消毒。之前，要对生物安全柜必须进行消毒。九、九、 生物安全柜的日常维护生物安全柜的日常维护 1.定期清洁操
22、作台面和前窗玻璃 2.保持实验室内空气质量,延长高效过滤器的使用寿命 3.定期检测紫外灯的照射强度,及时更换灯管 4.长期不用应定期进行维护性运行 高效过滤器应定期检测,及时更换. 5.做好使用和维护记录.五、 感染性物质的操作与防护感染性物质的操作与防护规范规范一）、实验室内检测样本的安全操作一）、实验室内检测样本的安全操作 在实验室内，进行感染性物质的操作，在实验室内，进行感染性物质的操作，包括其样本采集、内部运输、接收和开包括其样本采集、内部运输、接收和开启的方法不正确，都会增加造成相关人启的方法不正确，都会增加造成相关人员发生实验室感染的危险性。因此，进员发生实验室感染的危险性。因此，
23、进行感染性物质的操作应注意以下问题：行感染性物质的操作应注意以下问题：1、包装容器、包装容器用于装盛感染性物质的容器一般不建议使用玻璃制品，为了保证安全，最好采用塑料制品（根据实际需要而定）。样本容器应当坚固，不易破碎，带螺旋盖，盖好后不应有液体渗漏。所有的标本都应存放在容器内。容器应贴上标签以利于识别，标签上应有样品名称、采集日期、编号等必要的信息。样品的有关表格和/或说明不要绑在容器外面，而应单独放在防水的袋子里，以防止发生污染而影响使用。2、标本的接收标本的接收大规模接收标本的实验室应在一个专大规模接收标本的实验室应在一个专用的房间或区域进行。对于病原已知用的房间或区域进行。对于病原已知
24、的按国家规定可在的按国家规定可在BSL2操作的病原操作的病原微生物或未知的感染性材料，最低应微生物或未知的感染性材料，最低应在一个专用区域或房间接受，并在生在一个专用区域或房间接受，并在生物安全柜内打开外包装，操作人员应物安全柜内打开外包装，操作人员应穿防水的防护服，戴生物安全专用口穿防水的防护服，戴生物安全专用口罩和眼罩、手套。罩和眼罩、手套。 样本接受由收样员按照规定程序收样，样本接受由收样员按照规定程序收样，并做好收样登记，与送样人员做好交接并做好收样登记，与送样人员做好交接工作，最后双方签字确认。工作，最后双方签字确认。3、实验室内运输、实验室内运输为防止发生意外渗漏或溢出而威胁操作者
25、的为防止发生意外渗漏或溢出而威胁操作者的安全，在实验室内运输感染性物质时，应使安全，在实验室内运输感染性物质时，应使用金属的或塑料材质的第二层容器（如盒子）用金属的或塑料材质的第二层容器（如盒子）加以包裹，在第二层容器中应该有标本容器加以包裹，在第二层容器中应该有标本容器的支架，将标本容器固定在支架上，以使其的支架，将标本容器固定在支架上，以使其保持直立。第二层容器应耐高压或者能抵抗保持直立。第二层容器应耐高压或者能抵抗化学消毒剂的腐蚀，以便定期清除污染。封化学消毒剂的腐蚀，以便定期清除污染。封口处最好有一个垫圈，以防止发生渗漏。口处最好有一个垫圈，以防止发生渗漏。 按国家规定需要在按国家规定
26、需要在BSL-3或以上级实验室或以上级实验室操作的病原微生物或标本，应按国家规操作的病原微生物或标本，应按国家规定的防护等级，在相应级别的实验室的定的防护等级，在相应级别的实验室的安全柜内打开，并采取相应的防护措施。安全柜内打开，并采取相应的防护措施。为保证安全，不应在普通的为保证安全，不应在普通的BSL-1实验室实验室接受具有感染性的检测样本。接受具有感染性的检测样本。3、标本包装的打开、标本包装的打开接收并打开样本包装的人员应受过专接收并打开样本包装的人员应受过专业防护培训（尤其是处理破裂的或渗业防护培训（尤其是处理破裂的或渗漏容器）并应知道所操作标本的潜在漏容器）并应知道所操作标本的潜在
27、的健康危害，操作时要采取合适的防的健康危害，操作时要采取合适的防护措施。护措施。所有标本应该在生物安全柜里打开包所有标本应该在生物安全柜里打开包装，同时备有消毒剂以便随时处理可装，同时备有消毒剂以便随时处理可能出现的标本泄露。能出现的标本泄露。 打开包装前应仔细检查每个容器的外观、打开包装前应仔细检查每个容器的外观、标签是否完整，标签、送检报告与内容标签是否完整，标签、送检报告与内容物是否相符，是否有污染以及容器是否物是否相符，是否有污染以及容器是否有破损等，要登记详细的报告单并记录有破损等，要登记详细的报告单并记录处置方法。处置方法。 接收标本应由接收标本应由2人进行。人进行。避免感染性物质
28、扩散的要领避免感染性物质扩散的要领 为避免接种物从接种环上脱落，微生物为避免接种物从接种环上脱落，微生物接种环直径应为接种环直径应为23mm 并且完全闭合，并且完全闭合，柄的长度不应超过柄的长度不应超过6cm以最大限度地减以最大限度地减少抖动。少抖动。 应该使用密闭的微型电加热灭菌灯消毒应该使用密闭的微型电加热灭菌灯消毒接种环，以免在开放式的本生灯火焰上接种环，以免在开放式的本生灯火焰上灭菌时感染性物质溅落。最好使用一次灭菌时感染性物质溅落。最好使用一次性的、无需灭菌的接种环。性的、无需灭菌的接种环。 小心操作干燥的痰标本，以免产生气溶小心操作干燥的痰标本，以免产生气溶胶。胶。 要高压灭菌和要
29、高压灭菌和/或丢弃的废弃标本及培养或丢弃的废弃标本及培养物应放在防渗漏的容器里，如使用耐高物应放在防渗漏的容器里，如使用耐高压的医疗废物专用袋。放入废弃物容器压的医疗废物专用袋。放入废弃物容器前，标本的顶部应标明是安全的（如使前，标本的顶部应标明是安全的（如使用高压标签）。用高压标签）。 应对实验室进行定期的终末消毒。应对实验室进行定期的终末消毒。避免吸入或接触感染性物质的规范避免吸入或接触感染性物质的规范 在微生物实验操作中释放的较大颗粒和在微生物实验操作中释放的较大颗粒和小液滴（直径大于小液滴（直径大于5um）会很快落在操）会很快落在操作台表面以及操作者的手上，为了避免作台表面以及操作者的
30、手上，为了避免污染，操作者应戴一次性手套。实验人污染，操作者应戴一次性手套。实验人员做实验时要避免触摸嘴、眼和面部。员做实验时要避免触摸嘴、眼和面部。 严禁在实验室里吃喝以及储存食品和饮严禁在实验室里吃喝以及储存食品和饮料。料。 实验室内不许咬笔、嚼口香糖。实验室内不许咬笔、嚼口香糖。 实验室内不许化妆和装卸角膜接触镜。实验室内不许化妆和装卸角膜接触镜。 在任何可能导致潜在的传染性物质溅出在任何可能导致潜在的传染性物质溅出的操作过程中，应该保护好面部、眼睛的操作过程中，应该保护好面部、眼睛和嘴。和嘴。避免传染性物质接种的规范避免传染性物质接种的规范 要尽力避免由破裂的或由缺口的玻璃器要尽力避免
31、由破裂的或由缺口的玻璃器皿引起的感染性物质的意外感染。尽量皿引起的感染性物质的意外感染。尽量以塑料器皿和吸管代替玻璃器皿和吸管。以塑料器皿和吸管代替玻璃器皿和吸管。 锐器，如皮下接种针（针头）、玻璃吸锐器，如皮下接种针（针头）、玻璃吸管和碎玻璃可导致实验人员感染，因此管和碎玻璃可导致实验人员感染，因此要小心操作。要小心操作。 为减少注射器和针头造成的意外事故，为减少注射器和针头造成的意外事故，应尽量少用注射器和针头（可以用简单应尽量少用注射器和针头（可以用简单的工具开启瓶塞，这样就可以用吸管代的工具开启瓶塞，这样就可以用吸管代替注射器和针头）。必须使用注射器和替注射器和针头）。必须使用注射器和
32、针头时，要采用锐器保护装置。针头永针头时，要采用锐器保护装置。针头永远不要重新盖帽，若需对接不要直接用远不要重新盖帽，若需对接不要直接用手对接注射器和针头，用过的一次性物手对接注射器和针头，用过的一次性物品要放进专用的耐针刺的有盖容器中。品要放进专用的耐针刺的有盖容器中。对玻璃和对玻璃和“锐器锐器”的使用规范的使用规范 尽可能以塑料器皿代替玻璃器皿，只能尽可能以塑料器皿代替玻璃器皿，只能使用实验室级玻璃（硼硅酸盐），而且使用实验室级玻璃（硼硅酸盐），而且任何碎裂或有裂纹的器皿都应丢弃。任何碎裂或有裂纹的器皿都应丢弃。 皮下注射针不应用做吸管。皮下注射针不应用做吸管。二级生物安全实验室的二级生物
33、安全实验室的安全防护安全防护 病原微生物实验室的生物危险病原微生物实验室的生物危险 气溶胶气溶胶(aerosol)：固体或和液体微粒稳定地：固体或和液体微粒稳定地悬浮于气体介质中悬浮于气体介质中 形成的分散体系，粒径一般为形成的分散体系，粒径一般为0.001100m。 微生物气溶胶微生物气溶胶(microbial aerosol)：微粒中含有：微粒中含有微生物。微生物。 感染性气溶胶感染性气溶胶(infectious aerosol)：微粒中含有：微粒中含有致病微生物。致病微生物。气溶胶粒子的大小不同，经呼吸道到达体内的深度气溶胶粒子的大小不同，经呼吸道到达体内的深度和归宿不同和归宿不同 粒径
34、粒径 10m，一般被阻留在鼻腔内；，一般被阻留在鼻腔内； 510m，可到达支气管；，可到达支气管； 5m，可进入细支气管和肺泡。，可进入细支气管和肺泡。 气溶胶粒子越小，进入的部位就越深：气溶胶粒子越小，进入的部位就越深： 1m的在肺泡内沉积率最高；的在肺泡内沉积率最高； 0.4m的粒子能较自由地进出肺泡并可随呼气排出体外，的粒子能较自由地进出肺泡并可随呼气排出体外，沉积较少。沉积较少。生物安全防护应遵循的三个原则：配备安全防护设备。使用个体防护装置和措施（一级防护）对实验室的特殊设计和建设要求（二级防护）严格的管理制度、标准化操作程序和规程。生物安全的三项技术措施： 样品隔离技术 定向流技术
35、 消毒灭菌技术（物理、化学）二级生物安全实验室防护的基本要求 建设的防护要求 设备的要求 人员的要求 管理的要求 实验人员的免疫预防和健康监护要求 各类人员的岗位培训 实验废弃物和废水的处理要求生物安全实验室个人防护装备生物安全实验室个人防护装备 是指用于防止工作人员受到物理、化学是指用于防止工作人员受到物理、化学和生物等有害因子伤害的器材和用品。和生物等有害因子伤害的器材和用品。 在生物安全实验室中，这些器材和用品在生物安全实验室中，这些器材和用品主要是保护实验人员免于感染性材料的主要是保护实验人员免于感染性材料的各种方式的暴露，避免实验室相关感染。各种方式的暴露，避免实验室相关感染。生物安
36、全实验室个人防护装备生物安全实验室个人防护装备所涉及的防护部位 ： 1 1、眼睛、眼睛、 2 2、头面部、头面部、 3 3、躯体、躯体、 4 4、手、手、 5 5、足、耳（听力）、足、耳（听力） 6 6、呼吸道、呼吸道生物安全实验室个人防护装备生物安全实验室个人防护装备装备包括：装备包括： 1 1、眼镜（安全镜、护目镜）、眼镜（安全镜、护目镜） 2 2、口罩、面罩、防毒面具、口罩、面罩、防毒面具 3 3、帽子、帽子 4 4、防护衣、防护衣 ( ( 实验服、隔离衣、连体衣、实验服、隔离衣、连体衣、 围群围群) ) 5 5、手套、手套 6 6、鞋套、鞋套 7 7、听力保护器等。、听力保护器等。 个
37、人防护装备选择原则个人防护装备选择原则 在危害评估的基础上，在危害评估的基础上，实验室工作人员实验室工作人员根据不同级别的根据不同级别的防护要求选择适当的防护要求选择适当的个个人防护装人防护装备备。 结合工作的具体性质选择结合工作的具体性质选择个人防护个人防护装备装备 注意事项注意事项 1 1、个人防护用品应符合国家规定的有关、个人防护用品应符合国家规定的有关标准标准 2 2、对个人防护装备的选择、使用、维护、对个人防护装备的选择、使用、维护 应有明确的书面规定、程序和使用指导应有明确的书面规定、程序和使用指导 4 4、使用前应仔细检查，不使用标志不清、使用前应仔细检查，不使用标志不清、破损或
38、泄漏的防护用品破损或泄漏的防护用品（一）眼睛防护装备（一）眼睛防护装备1、安全眼镜和护目镜安全眼镜和护目镜 A A）在所有易发生潜在眼睛损伤（物理、化学和生物因）在所有易发生潜在眼睛损伤（物理、化学和生物因素引起）的生物安全实验室中工作时必须采取眼睛防素引起）的生物安全实验室中工作时必须采取眼睛防护措施护措施 B B）所选用的眼睛防护装备的类型取决于外界危害因子对）所选用的眼睛防护装备的类型取决于外界危害因子对眼睛危害程度。眼睛危害程度。建议建议：工作人员在生物安全实验室工作时不配戴隐型眼镜：工作人员在生物安全实验室工作时不配戴隐型眼镜 不得戴眼镜防护装备离开实验室区域不得戴眼镜防护装备离开实
39、验室区域 ！ 眼睛防护装备眼睛防护装备 a 、 安全镜安全镜 大多数情况大多数情况, ,佩戴侧面带有护罩的佩戴侧面带有护罩的安全眼镜安全眼镜能够保护工能够保护工作人员避免受到大部分实验室操作所带来的损害作人员避免受到大部分实验室操作所带来的损害. .d. 眼镜配戴和卸下方法示意图眼镜配戴和卸下方法示意图 1 1）对某些特殊的操作如腐蚀性液体喷溅出或细小颗粒飞溅）对某些特殊的操作如腐蚀性液体喷溅出或细小颗粒飞溅出时。出时。2 2）用铬酸类溶液洗涤玻璃器皿、碾磨物品）用铬酸类溶液洗涤玻璃器皿、碾磨物品. .3 3）或在使用玻璃器皿进行极具爆破或破损危害（例如在压）或在使用玻璃器皿进行极具爆破或破损
40、危害（例如在压力或温度突然增加或降低的情况下）的实验室操作时。力或温度突然增加或降低的情况下）的实验室操作时。 佩戴安全眼镜是不够安全的！佩戴安全眼镜是不够安全的！ - -在这些情况下，有必要保护整个面部和喉部，应该佩在这些情况下，有必要保护整个面部和喉部，应该佩戴面罩。戴面罩。 b 、安全护目镜安全护目镜 只有在进行有可能发生化学和生物污染物质溅出的实只有在进行有可能发生化学和生物污染物质溅出的实验时，必须验时，必须佩戴护目镜佩戴护目镜。 洗眼装置洗眼装置 规定：规定：BSL-2和和BSL-3实验室应配备紧急洗眼装置实验室应配备紧急洗眼装置 如发生腐蚀性液体或生物危害液体喷溅至工作人员的如发
41、生腐蚀性液体或生物危害液体喷溅至工作人员的眼睛时，应该（或在同事的帮助下）在就近的洗眼台眼睛时，应该（或在同事的帮助下）在就近的洗眼台（洗眼装置）用大量缓流清水冲洗眼睛表面至少（洗眼装置）用大量缓流清水冲洗眼睛表面至少1515到到 3030分钟。分钟。淋浴装置和应急消毒喷淋装置淋浴装置和应急消毒喷淋装置 1） 规定：规定：-BSL-2实验室在必要时应有应急喷淋装置实验室在必要时应有应急喷淋装置-BSL-3实验室应设置淋浴装置（清洁区），实验室应设置淋浴装置（清洁区）， 必要时在半污染区设置应急消毒喷淋装置。必要时在半污染区设置应急消毒喷淋装置。 2）要求：）要求： 保持管道的通畅、必须告知工作
42、人员应急消毒喷淋保持管道的通畅、必须告知工作人员应急消毒喷淋 装置的摆放位置、培训其操作方法。装置的摆放位置、培训其操作方法。 -应急消毒喷淋装置应急消毒喷淋装置 在使用中可用大量冷水淋洗污染的部位，淋洗时间至在使用中可用大量冷水淋洗污染的部位，淋洗时间至少需要少需要20分钟。分钟。 如果为化学物品溅出污染，用大量急水冲洗如果为化学物品溅出污染，用大量急水冲洗。 （二）头面部防护装备（二）头面部防护装备 口罩口罩 普通口罩仅可以保护部分面部免受普通口罩仅可以保护部分面部免受生物危害物质如血液、体液、生物危害物质如血液、体液、分泌液以及排泄物等喷溅物分泌液以及排泄物等喷溅物的污染的污染 适用于适
43、用于-BSL-1或或BSL-2实验室中使用实验室中使用 一般在使用时可同时佩戴面罩，以组合使用的方法一般在使用时可同时佩戴面罩，以组合使用的方法 保护整个面部保护整个面部,单独使用不能对工作人员提供呼吸保护。单独使用不能对工作人员提供呼吸保护。 正确佩戴和卸下外科口罩示意图正确佩戴和卸下外科口罩示意图 防护面罩（对整个脸部进行防护） 一次性面罩 一次性简易防护帽一次性简易防护帽 防护防护帽帽在生物安全实验室中佩戴简易防护帽可以保护工作人员在生物安全实验室中佩戴简易防护帽可以保护工作人员避免化学和生物危害物质飞溅至头部避免化学和生物危害物质飞溅至头部(头发头发)所造成的污染。所造成的污染。 要求
44、：要求： 工作人员在实验操作时应佩带防护帽工作人员在实验操作时应佩带防护帽 无纺布制成的一次性简易防护无纺布制成的一次性简易防护 （四）呼吸防护装备（四）呼吸防护装备 1、当实验室操作不能安全有效的将气溶胶限定在一定的范、当实验室操作不能安全有效的将气溶胶限定在一定的范围内围内 要求要求使用呼吸防护装备。使用呼吸防护装备。2、呼吸防护的有效装备、呼吸防护的有效装备 - 防护面具（正压面罩、个人呼吸器和正压防护服防护面具（正压面罩、个人呼吸器和正压防护服 ） 使用：使用：1、在进行高度危险性的操作（清理溢出的感染性物质和气、在进行高度危险性的操作（清理溢出的感染性物质和气溶胶）时，可以采用防护面
45、具来进行防护。溶胶）时，可以采用防护面具来进行防护。2、根据危险类型来选择防护面具。、根据危险类型来选择防护面具。 一次性防护面具一次性防护面具 一次性防护面具一次性防护面具 特点：特点：1、在防护面具中装有一种可更换的过滤器，它可以保护佩戴、在防护面具中装有一种可更换的过滤器，它可以保护佩戴者免受气体、蒸汽、颗粒和微生物及气溶胶损害的影响。者免受气体、蒸汽、颗粒和微生物及气溶胶损害的影响。2、过滤器必须与防护面具的正确类型相配套。、过滤器必须与防护面具的正确类型相配套。3、为了达到理想的防护效果，每一个防护面具都应与操作者、为了达到理想的防护效果，每一个防护面具都应与操作者的面部相吻合。的面
46、部相吻合。 正压防护服正压防护服 使用中的全罩式防护面具使用中的全罩式防护面具 正压面罩正压面罩（头盔正压式呼吸防护系统）（头盔正压式呼吸防护系统）正确佩戴一次性防护面具正确佩戴一次性防护面具 使用要点：使用要点：（1）佩戴时选择合适和合格的防护面具）佩戴时选择合适和合格的防护面具（2）遮盖住鼻子、口和下颚）遮盖住鼻子、口和下颚（3）用橡皮筋（松紧带）固定在头部）用橡皮筋（松紧带）固定在头部（4）调整在合适的面部位置并加以检验）调整在合适的面部位置并加以检验（5）吸气时防毒面具应该有塌陷状）吸气时防毒面具应该有塌陷状（6）呼气时在面具周围不应该漏气）呼气时在面具周围不应该漏气卸下口罩时：卸下口
47、罩时： 首先提起面具下方橡皮筋（松紧带）越过头部，首先提起面具下方橡皮筋（松紧带）越过头部， 然后提起面具上方橡皮筋（松紧带）使面具脱离面部，然后提起面具上方橡皮筋（松紧带）使面具脱离面部，值得注意的是：值得注意的是：一次性防毒面具使用完毕后应一次性防毒面具使用完毕后应先消毒再丢弃先消毒再丢弃卸下一次性防护面具卸下一次性防护面具（四）手部防护装备（四）手部防护装备 手套手套 1、在实验室整个工作过程中都应使用手套进行操作。、在实验室整个工作过程中都应使用手套进行操作。 2、在接触感染性物质、在接触感染性物质 （血液、体液、分泌液、渗出液、以（血液、体液、分泌液、渗出液、以及接触粘膜和非完整皮肤
48、时），必须使用合适的手套以保护及接触粘膜和非完整皮肤时），必须使用合适的手套以保护工作人员避免受到污染物溅出或生物污染的事故所造成的损工作人员避免受到污染物溅出或生物污染的事故所造成的损害。害。 3、手套如被污染，应该尽可能早的脱下，消毒后丢弃。、手套如被污染，应该尽可能早的脱下，消毒后丢弃。 4、手套应按所从事操作的性质符合舒适、灵活、握牢、耐、手套应按所从事操作的性质符合舒适、灵活、握牢、耐磨、耐扎和耐撕的要求，并应对所涉及的危险提供足够的防磨、耐扎和耐撕的要求，并应对所涉及的危险提供足够的防护。护。 5、对实验室工作人员进行手套选择、使用前及使用后的配、对实验室工作人员进行手套选择、使用
49、前及使用后的配戴及摘除等培训。戴及摘除等培训。 6、一次性手套不得重复使用、一次性手套不得重复使用,必须先消毒后丢弃。必须先消毒后丢弃。 规范使用手套的几个要点：规范使用手套的几个要点：1. 手套的选择：生物安全实验室一般使用乳胶橡胶或聚腈手套的选择：生物安全实验室一般使用乳胶橡胶或聚腈类或聚氯乙烯手套用于对强酸、强碱、有机溶剂和生物类或聚氯乙烯手套用于对强酸、强碱、有机溶剂和生物危害物质的防护危害物质的防护 2. 手套的检查手套的检查：在使用手套前应该检查手套是否退色、穿在使用手套前应该检查手套是否退色、穿孔（漏损）或有裂缝。可以通过充气试验，将其浸入水孔（漏损）或有裂缝。可以通过充气试验，
50、将其浸入水中观察是否有汽泡来检查手套的质量中观察是否有汽泡来检查手套的质量 聚氯乙烯手套乳胶手套 聚脂手套 3、手套的使用手套的使用： a） 一般情况下，佩戴一副手套即可一般情况下，佩戴一副手套即可（BSL-1BSL-1和和BSL-2BSL-2实验室实验室) ) b b）若在生物安全柜中操作感染性物质时若在生物安全柜中操作感染性物质时（BSL-3BSL-3实验室）实验室）应应 佩戴两副手套佩戴两副手套。 c） 在操作过程中，外层手套被污染，在操作过程中，外层手套被污染，立即立即用消毒剂喷洒手用消毒剂喷洒手套并脱下后丢弃在生物安全柜中的高压灭菌袋中并立即戴上套并脱下后丢弃在生物安全柜中的高压灭菌