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1、,室内质量控制,(Internal,Qualit,y,Control,IQC),由实验室工作人员，采取一,定,的方法和步骤，连续评价本实验室工,作的可靠性程,度，旨在监测和控制本实,验室工作的精密度，提高,本室常规工作中批内、批间样本检验的一致性，,以,确定测定结果是否可靠、可否发出报告的一项工作,。,质量保证,(Qual,ity,Assurance,QA),为,一产品或服务满足特定质量要求提供充分,可信性所,必要的有计划的和系统的措施。,室,间,质,量,评,二,价,(Exter,nal Quality,Assessment,EQA,),为客,观比较,一实验室的测,定结,果与靶值的差异由处单位
2、相内，采取一定的办法,，,连续、客观地评价实验室的,结,果，发现误差,并校正结,果，使各实,验,库,之闸,的,结果具,有,可比性。,这是对实验,室操作和实验方法的回顾,性评价，而不是用来决定在,实时的测定结果的可接受性。当,EQA,用来为执业许可,或实验室认证的目的而评价实验室操作时，常描述为,实验室能力比对检验,(,Proficiency,tes,载高,清，,PT)。,在以前的文献中，,EQA,常描述室间质,量控制。,准确度,(Accuracy),待测物的测,定值与其真值的一致性程度。准确度不能直接,以数值表示，通常以不准确度,来间接衡量。对,分析物重复多次测定，所得均值与其真值或,参考靶值
3、之间的差异,亦即偏差即为测定的不准,确度。,偏,差,(,Bias,),待测物的测定值与一,可接受参考值之间的差异,。,精密度,(,Precision,),在,一,定条件下所,获得,的独立的测定结果之间的一致性程度。与,准确度一样,，,精密度,同样也,是以不精,密度,来间接表示。测定不精密度的主要来源是,随机误差,，以标,准,差,fs,B,C,和,/,或变异系,数,(CV),具体表示。,SD,或,CV,越大，表,示重复测定的离散度越大,，精密度越差，,反之则越好。,下载高清,批,(Run),在相同条件下所获得,的一,组测定。,均值,(,Mean,),口,),准差,(Standard,deviat
4、ion,SD,或,口变异系数,(Coefficient of,variation,CV),s,标,正态分布,(Gaussiandistri,bution),当一质控,物,用同,一方法在,不同的时间,重复多次测定,，,当,测,是,数据足够多时，,如以横轴表示测定值,，,纵轴表示在大,量测定中槽应测定值的,个,数,，,则可得,到一个两头低，中间高,，中为所有测,定值的均值，左右对称的“钟形,”曲,线，亦即正态分布，又称高斯分布,下载高清,正态分布的基本统计学含义可用均数(),标准差,(s),和概率来说明。,-35o -25o,2So 3So,测 定 值,图,2,测,定,值,的,正,态,分,布,图,
5、测定值个数,临床基因护增检验实验室,常规测定步骤,标本收集：选,择测定,项目、标本收集和保存。,实验室测定：,标本接收、贴标签、样本处,理、,核酸扩增,产,物,检,测,。,测,定,的,有,效性和临床,诊疗价值。,口,报告和解释：,结果发出、结果解释和临床管,理。,下载高清,QA,标,本,接,收,贴,上,特,定,的,实,验,室,标,签,测,定,溜案穆寡济精,IQC,EQ,产,质量保证、室内质控和室,间质评之间的关系,患,者,图 1.1,临 床 检,验,中,涉,及,的,各-,步,骤,及,其,与,质,量,控,制,的,关,系,结,果,发,出,结 果 解 释,临,床,管,理,测准,采,保,择者,本,本,
6、释,晷,解,及,辕,标本收,集,定,备,集,存,选患,标,标,实,验,室,项,目,临床基因扩增检验实,验室,管理暂行亦法,室,c,、设置,和,审批,实验室管理,w,监督管理,口,附,则,下载高清,划,o,验,则,实,总,临床基因护增检验实验室的,设,置,临床标本的接收,基因扩增检验实验室设置的一般,要求,基因扩增检验实验室工作流,程,临床标本的接收,通常的工作流程：标本采集,血清,分离,编号保存或检测,口应在四个测定区域之,外的,地方或区域内接,收的标,集,.,容,.,在核酸提取时带入至标本制备区,下载高清,中,m,器,co,原始,cin,本应收,www,接,收,产物分析区,空气流向,扩增区,
7、空气流向,标本制备区,空气流向,试剂准备区,空气流向,续冲间,缕冲间,绩冲间,专用走廊,工作流向,较理想的临床基因扩增检验实验室设置,廊,制,备,廊,标,本,伟,备,试,齐,准,备,走,标,走,产携签测,扩,产,增,检,试,齐,备,测,本,扩增及,产物检测,试,准,备,走,廊,标本制备,标,本,制,备,试,齐,准,备,扩,增,及,产,物,检,测,走,廊,临床基因扩增实验室设置的一般原则,各区独立,doc,豆,丁,口注意风向,十,六,字方,口因地制宜,针,sin,.,com,口方便工作,WWW.,下载高清,基医护增检金实验室工作流,程,口进入各个工作区必须遵循严格,的单一方向顺序。,临床标本收集
8、运送、保,存,及其质量控制,口,标本收集,OC,标本保荐,Ww.do,口,标本运送,下载高清,标本采集时间对扩增检测结果的影响,口标本采集部位的准备,口标本的类型和采集量,采样质量的评价,采样及运输容器,标本采集中的防污染,标本采集时间回对扩增检测结果,在疾病发展,过程中标本,采集过早,或,过晚都可能会,给,出,假,阴性,结果。,Www.docin.,com,下载高清,标本采集部位的准备,口标本采集部位的清洁消,毒可去掉,污染的微生物或其它杂物，,但应,适度，过度清洁消毒有可能会去,掉或破坏靶微生物，故标本采,集,部位的准备应由训练有素的人员,进行。,标本的类型和采集量,标本的类型和采集量应根
9、据所测病原,体而定。般来说如果标本的量对,病原体培养够用的,话,，,则其量亦足以,用于核酸提,取,及,某,后的扩增检测。,口对于定量测定来说，,对标本的收集要,求更为精确。,下载高清,采样质量的评价,血清(浆)标本：溶血、脂血等,；,口分泌物、痰：评价内容包括细胞组成，,所需类型细胞的数量和核酸总量。,评价方法：包括肉眼观察，显微镜下,观察和化学分析等。,采样及运输容器,标本的采集材料如棉签应为一次性,口运输容器亦应为密闭的一次性装置；,采样所用的防腐剂,、,抗凝剂及相关,试剂材料不应对核酸扩增及检测过,程造成干扰。,下载高清,使用；,dOC,n,豆丁,标本采集中的防活染,采集中要特别注意污染
10、，防止混,入操作者的头发、表皮细胞、,痰液,等；,如使用玻璃器皿，必须经,高压灭,菌，以使可能存在的,RNAase,失活。,靶,核,酸,(尤其是,RNA),易,受核酸,酶的作用,而迅,速,降解豆,因此标,本的保存对于核酸扩增测定的,有效性极为重要,口使用,GITC,作为稳定剂保存标,本，标本可在室温下稳,定约7,天。,下载高清,标本保存,可临床体液标本长期保存应在-70下。,如为提取核酸后用于,DNA,扩增分析的,样本，可于10,mmol,/,L,Tris,1,mmol,/L,EDTA,(,pH,7.58.0),缓冲液中4 下,保存。,用,于,RNA,扩增分析的样本，则应于上,述缓冲液中-80
11、或液氮下保存。,口核酸的乙醇沉淀物,则可于-20下保,样本一经采集，则应尽可能快的送至,检测实验,室,o,口样本中如加,入,了,适,当 的,稳定剂，如用,程本和阐李入癡的的渍抗血,等，则可在室温下运送或邮寄。,实验室应根据待测靶核酸的特性，对,各种临床样本的运送,条,件,作出相应的高清,规定。,面床基因扩增检验的室内质量控制,测定前的质量控制,一核酸样本的制备及其,质量控制,一,统计学质量控制,口,质量控制的评价,测定前质量控制,实验室,设施,C,模,要,雷及,管,理,一理想的试剂和操作旁浊,口人员培训,下载高清,实验室设施、仪器设备及管,理,临床基因扩增检验实验室应有充分合,理的空间、良好的
12、照明和,空调设备；,实验室仪器设备应保养良好，实验用,品要达到相应的要求。,加样器的校,准?,带滤塞吸头的使用及质检?离,心机?,热循环仪?水浴箱和/或恒温干浴仪?,酶标仪和洗板机?,失控标准,实验失败,如靶温度或温度,差异超出允许范,围,待测孔未出现扩,曾，检测温度,打印程序不对,不符合要求,不符合要求,不符合,要,求载高清,质控方法,仪器校验实验,热电偶监测温度,测,每4个月一次,基因扩增仪器设备的质控,加样器,校准,每年2次,水浴箱,温度检测,每次实验,酶标仪,预防性维护,每年2次,及校准,Www.docin.co,m,程序打印,每次测定时,频,度,当仪器移动时,每月一次,仪器设备,扩增
13、仪,带滤塞吸头的使用及质检,首先制备一个含12%甘油及色,素(如甲基橙)的水溶液，如果吸,头的最大体积为100,l,则将加样,器吸取体积调至110,120,l,再,套上吸头后吸取上述有色,液体。如,果吸头质量好，则有色,液体不应出,现在滤塞之上，否则说明滤塞,不严。,带滤塞吸头的使用及质检,用实验来检验带滤塞吸头的质量：先纯化制备数,份强阳性和数份阴性核酸,标本，,然后将加样器吸,取量设至扩增加样所需的体，,使,用,待,评价带滤,塞吸头对一份强阳性样本,来,回,吸取10次(模拟,10份阳性样本的吸取),将最后一次的吸取液加,至一含扩增,皮应液,的,管中,C,臣,后,C,换,H,个新,吸头，,连
14、续吸取10份阴性样本分别至10个扩,增反应管,中，此过程重复3,5次，最后对每一管按所用,试剂方法进行扩增检测。强阳性样本应为强阳性，,阳性弱或出现阴性则说,明吸头可能含有扩增抑制,物。所有阴性样本应为阴性，出现阳性则表明高,清,头不能有效地防止气溶胶对加样器的污染,。,扩增仪子孔间温度的重复性和均一性,的检测方法,一是使用一种热电偶探针、微伏转换器和自动图示,记录仪组成扩增加热模,块孔内温度监测记录系统，,当孔间温度变异超出1时，其可测出,来。,口具体做法是将装有,TE,缓冲液并上加石蜡油的扩增反,应管放置于扩增仪各孔中，热电偶探针透,过扩增反,应管盖插至缓冲液中，然后按程序进行一个常规的,
15、PCR,扩增，加热模块如为96孔，则至少,要测定12,孔不同位置孔内的温度,，在整个扩增过程中，可移,动热电偶探针至上述不同孔中监测温度，但每一孔,内温度监测至少要有一个扩增周期。,扩增仪子孔间温度的重复性和均一,性,的检测方法,第二种方法并非直接测定孔内温度，,而是,通过扩增功能,来,间接,获知孔,间的均一性，,即将加有一已知的含一题农度的旧性质控,样本的扩增反应管置于,扩,增仪各孔中,按常,规进行扩,增,检测,，观,察结果的,。,致性程度，,如果有某一个或几个孔结果有问题，,则应,确定这一个或几个孔是否会重复性地得到,假阴性结果，如果是，,则表明相应孔的热,传导有损坏。,下载高清,核查点,
16、校准及记录温度,新鲜配制,先起动运行30分钟后再开始工作,有,有,有,有,有,使用后用10%次氯酸钠溶液消,毒，,再用70%乙醇清洁,紫外照,使用后用10%次氯酸钠溶液消,毒，,再用70%乙醇清洁,遵循单一工作流向,紫外照射,享,作,项,水浴箱、微量恒温器(加热模块),10%次氯酸钠溶液,生物安全柜,室内质控,弱阳性质控(定性),低、中、高浓度质控(定量),阴性质控：原样本,经历提取过程的空管,仅含扩增反应混合液,管,实验台面,射,加样器、离心机,实验室各区,实验室的日常工作管理,理想的试剂和操作方法,试剂盒的质检,定量测定的精密度是测定组成步骤的,变异和的平方根(,SD,)=,SD+SD+S
17、D+,上式中,SDWSD,CISD,。,是步骤,a,、,b,、,c,等(例如试剂,准备、标本采集,核酸提取、扩增和产物检测等,)的标,准差,载高清,理想的证剂和口操作方,法,改善测定精密度的措施必须首,先着重在最不精密的步骤上，,应对试剂准备、标本收集、核,酸提取、测定方法和仪器操作,写出“标准操作程序”,(SOP),质量手册,doC,质量体,系程序文,结,口,标准,操,作程序,实验室质量管理体系的建,立,质量手册,质量体系程序文件,标准操作程序(S0P),质量管理的内涵,写你所做的,口做你所写的,记录你已做的,怎样编写,SOP=?,XXXXXX,标准操作程序,X,X,X,X,单,位,及,实,
18、验,室,名,称,编号：,曰期：,年,月,曰,版本：,第,页,共,页,编写人,操作人,批准人,起用日期,XXX,XXX,XXX,年,月,曰,一,.,目的：,1.,2.,五。本操作程序变动程序：,二.适用范围：,三.操作人员：,四.操作步骤：,高清,临床基因扩增检验的操作主要是标本,处理中的核酸提取步骤，这其中所涉,及的又主要是加样器的使用，尽管操,作简单，但由于均为微量操作，要获,得稳定可靠的测定结果，操作人员,需,要一定的专业技术知识和,经验，要尽,可能做到知其然又知其所以然,。,核酸样本的制备、扩增检测,及其质量控制,一般核酸提取试剂促使靶核酸从细胞,内释,出的原理,核,酸的分离纯化,C,豆
19、丁,靶核酸提取的质量,口,临床标本及核酸提取中可能存在的抑制和,干扰物质,核酸样本制备及扩增检测的,质控,产物检测的质控,下载高清,一般核酸提取试齐促使靶核酸,从细包内释出的原理,靶核酸可以与宿主细,胞整合，核内游离,及胞浆内各种构形存在于细胞内，如,测,定的是病原微生物，则靶核酸存在于细,菌、病毒、原虫或真菌细胞,内，如果上,述细胞破裂，则靶核酸亦可,存在于细胞,外。,一般均使用去垢剂(如,Triton-100),裂解,细胞，用一种蛋白裂解酶(如蛋白,酶,K),消化结合于核酸的蛋白质，从而将靶核,酸从细胞内释放出来。,核酸的分离纯化,核酸的分离纯化就是要将蛋白、脂,类等干扰,核,酸,扩,增,
20、的物,质去除。,经典方法,口,硅吸附法,口对于商品核酸提取试剂盒，临床实,验室在使用前，必须对其核酸提取,纯度和效率进行评价。,下载高清,临床标本及核酸提取中可能存在的,抑制和扰物质,临床标本中：,血清或血浆中的血红素,及其代谢产物、痰中酸性多糖和糖蛋,白成份、降解靶核酸的核酸酶等。,口,核酸提取,中,：,许多试剂如乙二胺四乙,酸,(,EDTA,),、,去垢剂如十,二烷基硫酸盐,(,SDS,),和,chaotrope,试剂如异硫氰酸,胍和盐酸胍等、酚、氯仿,、乙醇等有,机溶剂。,对临床标本中可能存在的,抑制扰物的质控措施,口,质,(i,t,：,at,采,q,t,t,IC,)(通常称为,内,标)
21、的方法,内标,有两种,.,C,即竞争性的和非,竞争性的内标。,内标设置的必要性,?,下载高清,ro,控,on,用,内,ero,措,施,统计学质量控制,理想的室内质控样本的,条件,口测定中质控样本的设置、数量,及排列顺序,统计学质控的特点,统计质控方法,理想的室内质控样本的条件,基质与待测样本一致；,所含待测物浓度接近记验的凄定性水平；,口稳定；,口,靶值或预期结果已定,无已知的生物传染危险性；,单批可大量获得；,口价廉,下载高清,测定申质控样本的设置、数量,及排列顶序,每次检测究竟使用几个质控样本并,排在临床标,本中的哪个位置最为适宜?从理论上说，为最,大可能地检出实验的随机和系统误差,，应每
22、隔,几份临床标本插入1份质控样本，,但考虑国内,目前的实际情况及成本效益，一,般来说，如果,临床基因扩增检验的标本量不是特别大，定性,测定有一份接近,cut,-,off,的弱阳性和一份阴性质,控样本应可以满足要求。而定量测定则要根据,试验的测定范围，采用高、中、低三种浓度的,质控样本。至于在测,定中的排列顺序，可排于,标准品或校准品之后，临床样本之前。,临床基因护增检验室内质控的,口,即监测,污,染发,生的阴,性质控的,设,置,。,doc,(in,豆,丁,应,该,包,括,1,份,阴性原,血,清,样本,、,1份在粽,本,核酸提取过,程中带,入的,一,个空管和仅含扩增反应,混合液的管,。,下载高清
23、,阴生原血清质控样本的功能,监测实验室的以前扩增,产物的,污染；,口由实验操作所致的标本间的交,叉污染；,扩增反应试剂的污染。,在标本核酸提取过程中带,入的一,个,空管的功能,基本功能与阴性原血清质控样本,相同，但不同的通其基质为,水，,不含阴性原血清,质,控样,本中可能,有的扩增抑制物,Cir,因,而对污染的,反映更为灵敏；,不能取代原血清阴性样本。,下载高清,仅含扩增反应昆合液的管的功能,监测扩增试剂是否发生污染，具有较强的,污染鉴别性。,如想鉴别实验室是否发生污染，可将一个,或多个空管打开静置于标本制备区30,60分钟，然后加入扩增反应,混合液同时以,水替代核酸样本扩增,，如为阳性，而上
24、述,仅含扩增反应混合液的管为阴性，则说明,实验室以前扩增产物的存在。,统计学质控的特点,检验误差有两类，,一是系统误差，,一是随机,误差。,系统误差通,常表现,为,质接物,测定均值的漂移，,是由操作者所使用的,仪器设,备,、,试剂、标准,品或校准物出现问题而造成的,，,这种误差可,以通过前迷的措施,方,法加以控制,，,是可以,排,除的。,随机误差则表现为测定,SD,的增大，主要是,由实验操作人员的操作等随机因素所致，其,出现难以完全避免和控制,。,下载高清,统计学质控的功能,统计学质控的功能就是发现误差,的产,生及分析误差产生的原因，采取措施,予以避免。,口开展统计质量控制前，应将可以控制,的
25、误差产生因素尽可能地加以控,制，,这不但是做好室内质控的前提，也是,保证常规检验工作质量的先决条件。,统计质控方法,基线测定,质控规则的表达方式义,Levey-Jennings,质控图方法,Levey-,Jennings/,质,控,图纬合,oWestgard,多,规则质控方法,累积和,(,CUSUM,),质控方法,口“即刻法”质控方法,下载高清,最佳条件下的变异,(,Optimal,conditions variance,OCV,),和常规条件下的变异,(,Routine,conditions,variance,RCV,);,当,RCV,与,OCV,接近，或小于2,OC,V,时，,则,RCV,
26、是可以接受的。以上为,批间变异,。,口,批内变异,的测定；,口室内质控物的,测定准确度的,评价。,临床基因扩增检验0,C,统计,计算回题,可使用质控样本扩,增,后的拷贝,数,/,ml,或,dUm,来进行统计计算，,也可用其对数,值,进,行,。,由于基因,扩,增结,果,的原始数据通常,很大，故使用其对,数值,来进行质控,统计分析可能要更为方便一些。,下载高清,质控规则的表达方式及定义,口质控规则的表达方,式,口质控规则的功能,常用质控规则的符号及定,义,质控规则的表达方式,通常质控规则以符号,A,来,表示,，,其 中,A,为质控测,定中超出质量控制限的测定值的企数，,L,为控制限，,通常用均值或
27、均值13,sb,来,表示。,当质控测定,值超出,控,制,限,d,时，即可将,该批测定判,为失控。,常用的13,s,质控规则，其中1为原式中的,A,3s,为,原式中的,L,表示均值3,s,其确切的含义为：在,质控测定值中，如果有一个测定值超出均值王,载膏,范,围，即可将该批测定判为失控。,质控规则的功能,简单地说就是用于判断测定批的,失控还是,在,控,。,当整个质控过程中使用同一个质控物时,，,可用来判断单个或多个测定批内该质控物,的测定值是否失控；,当整个质控过程中使用两个或,两个以上的,不同的质控物时，可用来判断同一或,多个,测定批内的两个或两个以上的质控物,的测,定值是否失控。,定,一个质
28、控测定值超出2,s,控制限。,一个质控测定值超出3,s,控制限。,两个连续的质控测定值,向时超出2,s,或-2,s,控制限。,同一批测定中,两个不同浓度质控物的测定值之间的,差值超出4,s,控制限。,三个连续的质控测定值同时超出,cS,或,1,s,控制限。,四个连续的质控测定值同时超出,+1,s,或-1,s,控制限。,七个连续的质控测定值同时处于均值(),的同一侧。,七个连续的质控测定值呈现一个,向上或向下的趋势变化。,八个连续的质控测定值同时,处于均值()的同下侧,高清,九个连续的质控测定值同时处于均值()一的同,一侧。,十个连续的质控测定值同时处于均值()的同一侧。,符号,2s,13s,2
29、s,R4s,3s,41s,7x,7,8x,9x,10 x,常用质控规的符号及定,义,Levey-Jen,nings,质控图方法,也称,Shewhart,质控图，是由美国的,Shewhart,于1924年首先提出，并用,于工业产品的质量控,制。后来(二十,世纪五十年代初),Levey-Jennings,将其引入临床检验的质量控制。经,Henry,和,Segalove,的改良，即为目前,常用的,Levey-Jenn,ings,质控图。,CoC,www,.d,cin,.,com,下载高清,Levey-Jennings,质控图,基本的统学含义,稳定条件下，在20,个,TQC,结果中不应,有多于,1,G
30、,结果超,inspJ,95.5%,可,信限)限度；在1000个测定结,果中超,过 3,SDg9.7,可信限,),的结果不多,于3个。,如以3,s,为失控限，假失控的概率为,0.3%。,下载高清,质控图的记录的其它方面,IQC,数据是用来控制实际过程的，,因此其表达应清楚和直接，在质,控,图上记录结果时，应同时记,录测定,的详细情况，如日期、试剂、质,控,物批号和含量及测定者姓名等,。,Levey,-,Jennings,质控图方法的特,点,优点是简单明了；,口,缺点：,doC,豆,丁,以2,s,为失控限,，,假失控,的概率,太高，通常,不,能接受,).,Com,以3,s,为失控限，假失控,的概率
31、,低，但误差检出能力不强。,下载高清,Levey-Jennings,质控图,结合,Westgard,多规则质控方法,Westgard,多规则质控方法即是将前述的多,个质控,规则同时应用进行质控,判断的方法。最初常用的,有六个质控规则，即,12s、13s、2s、R4s、4,s,和10,x,其中12,s,规,则作为告警规则，当出现质,控测定值违反12,s,规,则时，则起动其它规则进行判,断。只有当使用所,有质控规则判断确定某测,定批在控时才说明该测,定批在控，只要上述质控规则之一,判断测定批失,控则即认为该测定批失控。通常上述规则中,，13,s,和,R,s,规则反映的是随机误差，而22,s,、,4
32、,s,和,10 x,反映的是系统误差，系统误差超出一定的程,度,也,可,从,1,和,R,规,反,映 出,来,Vestgard,多规则质控方法的特点,其,是,在,Levey-Jennings,质控图方,法的基础,k,产生的,n,自然也就具有,Levey,-,Jennings,质,控,图方法的优,点，可通过柏似的黄控图来进行分,析；,一假失控和假告警概率低；,口误差检出能力增强。,下载高清,累积和,(,GUSUM,),质控方法,累,积,和,(CUSUM),质控方,法,于,1977年由,Westgard,等提出，,对系统误差有较好的测出能力。,常用的累积和,(CUS,UM,),质控规,则,质控规则,
33、起动累积和计算的阈值,(k),质控限,(h),2.7s,3.0s,5.1s,1.0s,1.0s,0.5s,CS,0,7,CS0,累积和,(CUSUM,质控具体步骤,与上述其它质控方法一样，首先得到测定,均,值和标准差,(s);,定,(,),动,;,累积和计算的阈值,(k),和质控,口确定质控规则；,口绘制质控图；,累积和,(CUSUM),计算；,如有失控，则采取措施予以纠正，,再开始上,述累积和计算。,累积和,(GUSUM0),质控图,x+2.7s,hu,x+1.0s(ku),x-1,0s,k1,x-2.7s,(hl),CUSUM,质,控,图,“即刻法”质控方法,“即刻法”质控方法的实质是,一
34、种统计学方法，即,Crubs,异,常值取舍法；,口只要有3个以上的数据即可决,定是否有异常值的存在。,“即刻法”质控方法具体步骤,将连续的质控测定值按从小到,大,排列，,即,X,、,X2,、,(x,为最,小,值,，,x,为最,大,值,),计算均值()和标准差,(,按下述公式计算,SI,上限,和,SI,下限值；,SI,上限=,(x,最大值,-,均,值,),/,s,SI,下限,=(,均,值,-,X,最大值)/,s,将,SI,上限和,SI,下限值与,SI,值表中的数值比较,。,下载高清,质控结果的判断,SI,上限和,SI,下限值均,n3s,对应的值时，说明,该质控测定值的变化,已超出3,s,属“失控
35、”。,室内质控数居的平价,IQC,为一集体活动，除实际测定者外，还,应有另外一人对测定数据进行质检。,不能将,IQC,作为一个监察方法，当发现一,次测定未达到质量标准时，应以建,设性的,而非批评,的方,式去探查,朱,控的原,困,。,除了将,IQC,数据作为日常质控外,，还应定,期评价累积数据以监测在测定操作中的长,期变化趋势。,评价应定期进行。,下载高清,那性质控样本常见的失控,原因,核酸提取中的随机误,差。如核酸提取中的,丢失、有机溶剂的去除不彻底、标本中扩,增抑制物的残留等。,口仪器的问题。如扩增仪孔间温度的不均一,性、孔内温度与所示温度的不一致性,等。,口试剂的问题。如,Taq,酶和/或
36、逆转录酶的,失活、探针的纯度及标记效率和核酸提取,试剂的效率等。,阴生质控样本的失控原因,-,主要为扩增产物的,染”和/或临床标本的核酸提,WWW,.,COCin,.,Com,取过程中发生的标本间的交叉,“污染”,下载高清,“,室内质控的局限性,IQC,可确保每次测定与确定的质量标,准一致，但不能保证在单,个的测定样,本中不出现误差。比,如样本鉴别错误、,样本吸取错误、结果记录错误等。此,类误差的发生率在不同的实验室有所,不同,，,一般要求小于0,.,1%,且应均,匀地分布于测定前、测定中和测定后,的不同阶段。,影向临床基因扩增检验结果,的,最关键因素,口产物“污染”(,Carry,-over
37、),口,测定人员的操作,n,示本混淆；贴,错标签,w,核,酸提取等,com,口试剂,下载高清,避免基因扩增检验假阳性结果的措施,严格的实验室分区；,使用带“滤心”的吸头；,设立“阴性”质控(,与标本同时处理);,口使用防“污染”(含,UNG),的,PCR,试剂；,临床“假阳性”问题,：病原微生物如结核,杆菌经药物治疗后已死亡，但,PCR,仍可为,阳性，故治疗结束后至少两周内不宜做,PCR,检测。,避免基因扩增检验假阴性结果的措施,避免由于来自于标本的血红蛋白、肝素、,某些激素或,来自,标本,处理中,的去垢剂、有,机溶剂的抑制作用的措施纯化核酸；,标,本重复双份测定；稀释,标,本。,口,使用“内
38、质控,W.,CIotimalom,Control,IC,),以避免由于试剂、扩增仪或,标本处理不当所致的假阴性；须注意的是，,如果靶浓度很高，可致在靶核酸和,IC,之,间,产生竞争，而使,IC,受,抑制，此时,IC,可为,清,阴性。,室间质量价,(EQA),IQC,确保实验室室内测定质,量的一致性，而,EQA,则提供,将实验室测定情况与一室间,和客观标准进行回顾性比较,的数据。,EQA,在质量保证中对,IQC,有,补充作用。,EQA,一,的程序设计,确定质评方案，定期发放质评样本；,要求参加质评实验室,报告结,果的单位要一,致，以便千统计,C,口报告要清楚、简洁；,要求参评实验,蜜,在测定,日
39、,QA,样,本,时，要以 与常规样本完全相同的方式测定；,口对测定方法、试剂及仪器等归纳总,结；,对参评实验室的测定要有评价；,EQA,报告要迅速及时。,下载高清,50A,质评样本,样本特征与患者样本应尽量,致,口样本浓度与试验的临床应用相,适应,在样本发放的条件下,稳定,不存在不可避免的传染危险性,口,定性测定应为明角的阴性或阳,性,定,量,测,是,W,则,提供,参,考方法值或参,加实验室的修正均值或参考实验室,均值或方法或归组的方法均值,下载高,清,特定参评实验室的评分根据其与其它,实验室得分,之间的关系，可分为绝对评分和相对评,分两种模,式。,口,绝对评分,就是根据已定的靶值对参,评实验
40、室测定,的每份质评样本计分，然后再计算该次质评的总,分，以得分的高低评价参评实验室的水,平。,口,相对评分则,是将参评实验室质评得分与所有参评,实验室的平均分进行比较，观察其得分在全部,参,评实验室中所处的位置。,相对评分和绝对评分的例子,相 对评,分c,英国,EQAs,WWw,.,docin,.,Com,一绝对评分：美国,CAP,下载高清,采用何种评分方法较好?,建立一个质评体系，上述绝对评分和相对,评分的方法均可以采用，其实质内容,并无,太大的差别，只不过是表现形式的不同，,尤其是在定量测定。从室间质量,评价对改,善实验室测定质量的作用来看，究竟是采,用上述哪一种或另外制定的评价方法其实,
41、并不重要，关键是要有一个评价方法，从,而以其为标准去评,价实验室的测定。,50A,对测定技术的,评价,使用适当的统计学方,法,全面地对方法试齐和单企参评实验,室测定技术进行评价,指明严重误差,适当时评价测定的其它方面(如测定,干扰)。,下载高清,互0,A,的局限生,参评实验室没有同等的对待,EQA,样本和患者样本,可能会妨碍给出不同结果的改良方,法的发展,在不同的,EQA,程序中，对实验室,的评价可能不同,doc,谢谢,ljm,.C,a,谢谢观看/欢迎下载,BYFATHIMEANAVSION OF GOOD ONE CHERSHESAND THE,ENTHUSASM THAT,PUSHES ONE TO,S,EEKITS,FULEFLLMENT,REGARDLESS,0FOBSTACLEs.BY,FATHIBY,FAITH,